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一文攬盡:熒光定量PCR擴增曲線哪個階段最重要
2021-11-17
qPCR擴增曲線一般分成四個階段:基線期、指數(shù)期、線性期和平臺期。那么每個階段PCR產物量的變化都有什么區(qū)別呢?哪個階段最重要呢?小編這就一一道來;期PCR起始時,剛開始前幾個循環(huán)的熒光
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針對新手專用PCR原理講解與分析
2021-11-9
什么是實時熒光定量PCR(qPCR)?在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過Cq值和標準曲線對起始模板進行定量分析的方法。一.使DNA產物發(fā)出熒光的常用標記方
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Azure Cielo™ 實時熒光定量PCR系統(tǒng)在快速可靠地檢測新冠病毒的應用
2021-11-3
在應對病毒性大流行疾病時,為了有效控制病毒傳播和減少感染人群,快速且可靠的診斷是至關重要的。那么目前檢測COVID-19的 "黃金標準 "依賴于一種成熟的技術,即反轉錄定量聚合酶鏈反
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新手須知的qPCR操作技巧詳解(下篇)
2021-8-26
上一篇文章跟大家介紹了qPCR實驗中引物設計及加樣的相關操作技巧,今天我們再跟大家分享其他的實用技巧,這些入門級知識一定要掌握牢固哦。1、陰性對照的技巧:陰性對照一般是指用水代替模板的反
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MeRIP-qPCR方法原理、結果含義、展示方法及應用細談
2021-8-10
m6A等RNA修飾的主要研究手段是通過MeRIP方法對發(fā)生修飾的片段進行富集,其后進行高通量測序分析修飾位點。而無論是一篇僅展示修飾位點分布特點的譜學文章,還是深入研究修飾調控基因表達機制的文
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PCR Efficiency在線分析工具在預測PCR擴增效率的使用
2021-7-30
目前已開發(fā)多種工具可以進行PCR引物的設計,但大多數(shù)工具只考慮避免發(fā)夾結構形成、3'末端核苷酸的選擇、引物解鏈溫度等問題,并沒有考慮內在擴增子的特征以及沒有預測給定擴增子和引物對的P
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新手須知的qPCR操作技巧(上篇)
2021-7-30
實時熒光定量 PCR(qPCR)自問世以來,就受到了廣大生命科學實驗工作者和醫(yī)院檢驗工作者的極大關注,使得該技術得到了很快的普及。雖然qPCR技術目前應用方向十分廣泛,但是仍碰到很多用戶在實驗
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熒光定量PCR實驗流程中常見的陰性對照與陽性對照介紹
2021-7-15
什么鬼?實驗結果又不理想,Ct值怎么又這么大呢?是哪一步出現(xiàn)了問題呢?哎哎哎,怎么沒有擴增曲線呢?在您看到熒光定量 PCR 實驗結果時,是不是也發(fā)出過這樣的疑問呢?總感覺哪個實驗步驟出現(xiàn)了
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次
qPCR性能分析的四大要素-效率、線性動態(tài)范圍、檢測限和精密度
2021-6-28
MIQE指南中明確提出,進行qPCR實驗時必須測定以下檢測性能特點:PCR的效率、線性動態(tài)范圍、LOD和精密度。1、PCR的效率:強大和精確的qPCR測定通常具有高效率。在報告目的基因相對于參照基因的mR
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次
實時熒光定量PCR引物設計原則中擴增子大小對qPCR產量影響的應用
2021-6-11
一般情況下,實時熒光定量PCR引物設計原則中會提到擴增子大小對實時熒光定量PCR的擴增效率有一定作用。所以通常建議使用相對較短的擴增子長度,范圍為50到150個堿基對(bp)。由于小片段不太容易
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次
MIQE中核酸質量控制環(huán)節(jié)的操作簡易說明
2021-6-3
RNA樣本:比較不同的樣本時,應保證各樣本中含有大致相同量的RNA,因此需要對所提取的RNA進行定量。常用的定量方法包括:分光光度法、熒光染料檢測、瓊脂糖凝膠電泳、毛細管凝膠電泳和3':5
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次
超敏一步巢式Taqman qPCR熒光核酸檢測技術的機理及應用優(yōu)勢
2021-3-23
巢式PCR具有很高的靈敏度和特異性,但傳統(tǒng)的巢式PCR采用兩對引物,通過兩輪PCR,進行目標產物的擴增。這種操作的不便性,使得其高靈敏度的特性難以應用到快速檢測和臨床診斷中。在單管巢式PCR的
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無需ROX校準的Azure Cielo™ Real-Time PCR光學系統(tǒng)的應用
2021-1-29
ROX是一種廣泛使用的惰性熒光染料,通常添加到qPCR反應液中以校正熒光信號。然而,隨著熒光技術在儀器中的發(fā)展,比如在Azure Cielo™實時熒光定量PCR系統(tǒng),為了標準化而單獨使用染料的步驟
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ac4C榮登Nature-RNA修飾研究大有可為
2020-10-20
RNA修飾是表觀遺傳學中調控轉錄后基因表達的關鍵過程,目前對m6A RNA修飾的研究已進行的如火如荼,但除了m6A以外仍有多種RNA修飾類型參與調控轉錄后的基因表達,其中包括m1A、m5C、m7G、2&rsquo
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去甲基化酶ALKBH5在胰腺癌中的應用
2020-7-9
文章導讀表觀遺傳修飾如m6A甲基化在腫 瘤的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。而甲基化酶對ai癥的影響也受到廣 泛關注。其中去甲基化酶ALKBH5已被報道過能通過維持乳腺ai細胞的干細胞性而促進腫 瘤的形
1712
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PCR疑難問題粉碎機:逆轉錄PCR的操作要點與方法
2020-6-30
【前情回顧】PCR疑難問題粉碎機(一)——終點PCR 【前情回顧】PCR疑難問題粉碎機(二)——熒光定量PCR 逆轉錄 PCR(Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR)是一種以 RN
2516
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PCR疑難問題解答第二篇:熒光定量PCR
2020-6-16
【前情回顧】PCR疑難問題粉碎機(一)——終點PCR 實時熒光定量PCR(quantitative PCR, qPCR)通過對PCR擴增反應中的每一個循環(huán)產物熒光信號的實時監(jiān)測從而實現(xiàn)對起始模板的定性
860 次
30分鐘的精確定量-染料法熒光定量PCR
2020-5-14
【前情回顧】 【1】PCR試劑選擇困難癥?其實可以很簡單!點擊了解 【2】高分辨率熔解曲線(HRM)分析預混Mix(PCR),用于基因篩查?點擊了解 【3】飛行時間質譜(MALDI-TOF)法SNP分析(P
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RT-qPCR常用的SYBR@Green I雙鏈DNA結合染料的應用
2020-5-13
隨著新冠病毒肆虐全球,聊病毒是個敏感話題。今天我們就從這個敏感話題著手,好好聊一聊。 病毒是一種個體微小,結構簡單,只含一種核酸(DNA或RNA)。我們現(xiàn)在提起來就咬牙切齒的的新冠病毒
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如何提高PCR的擴增特異性
2020-5-11
疫情當下,最熱頻的詞匯莫過于核酸檢測了。而核酸檢測最核心的技術也越來越被大眾所熟知,就是我們高中就學過的聚合酶鏈式反應,又稱為PCR。 自從1983年,Kary Mullis才發(fā)明出這個用于擴增
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