LUMEX微芯片實時熒光定量PCR助力非洲豬瘟檢測

LUMEX微芯片實時熒光定量PCR助力農(nóng)業(yè)農(nóng)村部全面開展非洲豬瘟檢測行動
 

1月16日，甘肅省慶陽市防制重大動物疫病指揮部在對1月13日慶城縣非洲豬瘟疫情流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，西峰區(qū)大龍燚火鍋店經(jīng)營食品“撒尿肉丸”中檢測出疑似非洲豬瘟病毒陽性，該產(chǎn)品產(chǎn)地為江蘇省泰州市，受委托生產(chǎn)企業(yè)為泰州安井食品有限公司。隨著非洲豬瘟疫情的波及面越來越廣，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也非常重視，早在1月2號就發(fā)文《中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告 第119號》要求在非洲豬瘟防控期間，全面開展生豬屠宰及生豬產(chǎn)品流通等環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測 ，這項公告將于2019年2月1日起正式執(zhí)行。

對非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果為陰性且按照檢疫規(guī)程檢疫合格的生豬產(chǎn)品出具動物檢疫證明，并注明檢測方法、檢測日期和檢測結(jié)果等信息，其中，出具跨省調(diào)運動物檢疫證明（產(chǎn)品A）的，要求PCR檢測結(jié)果為陰性。對未經(jīng)非洲豬瘟病毒檢測或檢測結(jié)果為陽性的，不得出具動物檢疫證明。生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)主動配合駐場官方獸醫(yī)工作，不得拒絕、阻礙或干擾官方獸醫(yī)監(jiān)督核查。 

相比于非洲豬瘟（ASF），豬瘟（CSF）也是一種急性、熱性和高度接觸性的，病毒性傳染病。豬瘟在世界養(yǎng)豬國家有不同程度流行，國際獸疫局將本病列入A類傳染病，病作為國際重要建議對象。由于豬瘟造成的經(jīng)濟損失嚴(yán)重，促使很多國家制定和執(zhí)行豬瘟的防治和根除計劃，并在歐美20多個國家取得成功。對于豬瘟（CSF）等疫病疫情的檢測，其中最重要的一種檢測方法就是利用RT-PCR方法，包括豬瘟病毒常規(guī)監(jiān)測和豬瘟強毒和弱毒分子鑒別診斷方法。

 實時熒光定量PCR AriaDNA系列及豬瘟病害檢測試劑盒

針對豬瘟疫病疫情監(jiān)測針對，LUMEX提供的實時熒光定量PCR技術(shù)結(jié)合微芯片平臺，配合專用方法試劑包，使豬病疫情疫病分析監(jiān)控更加簡單快捷。專利微芯片技術(shù)保證樣品分析避免交叉污染，檢測結(jié)果更為可靠，降低試劑消耗，降低分析成本，凍干芯片和微孔空芯片平臺可選，凍干芯片無需冷鏈，一個平臺可直接測定多種病菌。

豬類疫病疫情檢測種類：豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬野毒病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒2型單、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬口蹄疫病毒。

檢測步驟：

AriaDNA微芯片PCR分析儀的分析時間比一般商品化PCR分析儀要縮短1倍以上�？商峁�專用微孔凍干即用平臺和通用開放式平臺體系，配合AiraDNA熒光定量PCR實現(xiàn)快速分析測定。開放性的試劑平臺，根據(jù)檢測需求通用客戶已有的酶、引物、探針等試劑。 試劑節(jié)省，檢測速度快。能夠匹配多數(shù)的市面上試劑盒產(chǎn)品，形成從提取到分析的通用型的分析平臺。

試驗比對-禽流感、豬流行腹瀉樣本檢測結(jié)果比對

實時熒光定量AriaDNA PCR儀器穩(wěn)定性較好，檢測DNA和RNA熒光PCR現(xiàn)有產(chǎn)品的重復(fù)性較好，使用AriaDNA PCR儀器檢測DNA和RNA熒光PCR現(xiàn)有產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線及擴增效率很好，基本上和ABI儀器保持一致，甚至優(yōu)于ABI儀器。 

分析實例：-PEDV豬豬流行性腹瀉病毒檢測

豬流行性腹瀉泄病毒檢測中，使用實時熒光定量PCR AriaDNA結(jié)合微芯片平臺技術(shù)，精準(zhǔn)測定各類濃度的豬病病菌，對豬類疫病疫情的監(jiān)控和預(yù)防具有重要意義。

　　為進一步做好非洲豬瘟防控工作，降低生豬屠宰以及生豬產(chǎn)品流通環(huán)節(jié)病毒擴散風(fēng)險，切實保障生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，根據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》《重大動物疫情應(yīng)急條例》《生豬屠宰管理條例》等法律法規(guī)及有關(guān)規(guī)定，在非洲豬瘟防控期間，全面開展生豬屠宰及生豬產(chǎn)品流通等環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測�，F(xiàn)就有關(guān)事項公告如下。 

　　一、生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)按照有關(guān)規(guī)定，嚴(yán)格做好非洲豬瘟排查、檢測及疫情報告工作，并主動接受監(jiān)督檢查。 

　　二、生豬屠宰廠（場）要嚴(yán)格入場查驗，發(fā)現(xiàn)有下列情形之一的，不得收購、屠宰有關(guān)生豬： 

　�。ㄒ唬�無有效動物檢疫證明的； 

　�。ǘ�）耳標(biāo)不齊全或檢疫證明與耳標(biāo)信息不一致的； 

　　（三）違規(guī)調(diào)運生豬的； 

　�。ㄋ模┌l(fā)現(xiàn)其他違法違規(guī)調(diào)運行為的。 

　　三、生豬屠宰廠（場）要按照規(guī)定，嚴(yán)格落實生豬待宰、臨床巡檢、屠宰檢驗檢疫等制度。在待宰圈發(fā)現(xiàn)生豬疑似非洲豬瘟的，應(yīng)當(dāng)立即暫停同一待宰圈生豬上線屠宰；在屠宰線發(fā)現(xiàn)疑似非洲豬瘟的，應(yīng)當(dāng)立即暫停屠宰活動。同時，按規(guī)定采集相應(yīng)病（死）豬的血液樣品或脾臟、淋巴結(jié)、腎臟等組織樣品等進行非洲豬瘟病毒檢測，檢測結(jié)果為陰性的，同批生豬方可繼續(xù)上線屠宰。 

　　四、生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)在駐場官方獸醫(yī)組織監(jiān)督下，按照生豬不同來源實施分批屠宰，每批生豬屠宰后，對暫儲血液進行抽樣并檢測非洲豬瘟病毒。經(jīng)PCR檢測試劑盒或免疫學(xué)檢測試紙條檢測為陰性的，同批生豬產(chǎn)品方可上市銷售。其中，經(jīng)PCR檢測為陰性的，有關(guān)生豬產(chǎn)品可按照規(guī)定在本省或跨省銷售；經(jīng)免疫學(xué)檢測試紙條檢測為陰性的，有關(guān)生豬產(chǎn)品僅可在本省范圍內(nèi)銷售。 

　  五、按照本公告第三、第四條規(guī)定，檢出非洲豬瘟病毒陽性的，生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)?shù)谝粫r間將檢測結(jié)果報告當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門，并及時將陽性樣品送所在地省級動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)檢測（確診）。經(jīng)確診為非洲豬瘟病毒陽性的，生豬屠宰廠（場）要在當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門監(jiān)督下，按規(guī)定撲殺所有待宰圈生豬，連同陽性批次的豬肉、豬血及副產(chǎn)品進行無害化處理，對屠宰車間和相關(guān)場所進行徹底清洗消毒。48小時后，可向當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門申請評估，經(jīng)評估合格的，方可恢復(fù)生產(chǎn)。 

　　六、生豬屠宰廠（場）非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果須經(jīng)駐場官方獸醫(yī)簽字確認(rèn)。對非洲豬瘟病毒檢測結(jié)果為陰性且按照檢疫規(guī)程檢疫合格的生豬產(chǎn)品出具動物檢疫證明，并注明檢測方法、檢測日期和檢測結(jié)果等信息，其中，出具跨省調(diào)運動物檢疫證明（產(chǎn)品A）的，要求PCR檢測結(jié)果為陰性。對未經(jīng)非洲豬瘟病毒檢測或檢測結(jié)果為陽性的，不得出具動物檢疫證明。生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)主動配合駐場官方獸醫(yī)工作，不得拒絕、阻礙或干擾官方獸醫(yī)監(jiān)督核查。 

　　七、各地畜牧獸醫(yī)主管部門要組織制定生豬屠宰廠（場）樣品采集和檢測等有關(guān)要求，強化培訓(xùn)指導(dǎo)和監(jiān)督檢查，規(guī)范采樣、檢測和記錄等工作。要結(jié)合當(dāng)?shù)毓ぷ鲗嶋H，建立上市生豬產(chǎn)品和屠宰廠（場）暫存產(chǎn)品抽樣檢測核查制度，確保屠宰廠（場）采集樣品和檢測結(jié)果的真實性和代表性。在風(fēng)險評估和追溯調(diào)查工作中，省級以上獸醫(yī)機構(gòu)實驗室在生豬產(chǎn)品中檢出非洲豬瘟病毒陽性的，應(yīng)當(dāng)就地銷毀相關(guān)生豬產(chǎn)品，有關(guān)生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)主動做好同批產(chǎn)品及流行病學(xué)相關(guān)風(fēng)險產(chǎn)品的流向調(diào)查，并按規(guī)定銷毀，暫停屠宰活動，并按照本公告第五條規(guī)定實施清洗消毒，按規(guī)定程序恢復(fù)生產(chǎn)。發(fā)現(xiàn)因檢測造假造成生豬產(chǎn)品上市，被省級以上獸醫(yī)機構(gòu)實驗室檢測為非洲豬瘟病毒陽性的，除按照上述規(guī)定執(zhí)行外，生豬屠宰廠（場）應(yīng)當(dāng)徹底清洗消毒，1個潛伏期（15天）后，方可按照本公告第五條規(guī)定程序恢復(fù)生產(chǎn)。 

　　八、在生豬屠宰廠（場）檢出非洲豬瘟病毒陽性的，當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門要組織做好陽性生豬和生豬產(chǎn)品的溯源追蹤，對生豬來源養(yǎng)殖場（戶）及其周邊地區(qū)進行嚴(yán)格檢測排查，涉及其他行政區(qū)域的，應(yīng)當(dāng)及時將相關(guān)情況和資料通報有關(guān)地方畜牧獸醫(yī)主管部門，共同開展溯源追蹤。 

　　九、檢測非洲豬瘟病毒，應(yīng)當(dāng)使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)或經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心比對符合要求的檢測方法開展檢測。 

　   十、本公告自2019年2月1日起執(zhí)行。 

　                                                                                                                                 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 

                                                                                                       2019年1月2日