天木生物助力高校實(shí)現(xiàn)谷氨酰胺酶突變株的高通量篩選

近日，清華大學(xué)張翀、安徽工程大學(xué)薛正蓮研究團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用DREM cell將液滴微流控技術(shù)與基因編碼熒光生物傳感器相結(jié)合，成功實(shí)現(xiàn)了高產(chǎn)谷氨酰胺酶突變株的超高通量篩選，相關(guān)研究成果以“Combining genetically encoded biosensors with droplet microfluidic system for enhanced glutaminase production by Bacillus amyloliquefaciens”為題，發(fā)表在生物化工領(lǐng)域?qū)�業(yè)期刊《Biochemical Engineering Journal》上。

工業(yè)微生物常用于重要的生物和化學(xué)制品的生產(chǎn)，優(yōu)良菌株的選育是生物產(chǎn)業(yè)的核心工作之一。近年來(lái)合成生物技術(shù)的快速發(fā)展使得高性能工業(yè)菌株基因型的理性構(gòu)建性顯著增加，但如何從海量候選菌株庫(kù)中高通量篩選到規(guī)模生產(chǎn)用的工業(yè)菌株仍面臨挑戰(zhàn)。多孔板（MTP）篩選系統(tǒng)和流式細(xì)胞術(shù)（FACS）是研究者常用的篩選手段，但MTP通量較低，而FACS難以用于檢測(cè)胞外分泌的代謝物。液滴微流控技術(shù)在微生物育種領(lǐng)域的應(yīng)用，成功實(shí)現(xiàn)了大容量突變庫(kù)的全面評(píng)價(jià)以及高效篩選，不僅在篩選通量方面實(shí)現(xiàn)了大幅度提升，有效提高了菌株選育工作效率，而且在篩選成本方面也展現(xiàn)出巨大優(yōu)勢(shì)，可顯著降低篩選過(guò)程中試劑耗材的用量，將單克隆的篩選成本降低至十分之一或百分之一，實(shí)現(xiàn)高通量、低消耗的優(yōu)良工業(yè)菌株選育。天木生物基于液滴微流控技術(shù)開(kāi)發(fā)了皮升級(jí)單細(xì)胞分選平臺(tái)--DREM cell（Droplet entrapping microfluidic cell-sorter）具有體積小、通量高、體系封閉、無(wú)交叉污染等特點(diǎn)，越來(lái)越成為科學(xué)研究和企業(yè)生產(chǎn)的重要技術(shù)手段。

清華大學(xué)張翀、安徽工程大學(xué)薛正蓮研究團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了一種利用谷氨酸擬熒光蛋白傳感器 iGluSnFR 的谷氨酰胺酶熒光檢測(cè)方法，相較于傳統(tǒng)的高效液相色譜法，速度提高了700倍�；�于iGlusnFR傳感器，結(jié)合DREM cell單細(xì)胞分選平臺(tái)實(shí)現(xiàn)谷氨酰胺酶生產(chǎn)菌株的高通量篩選，單次實(shí)驗(yàn)可篩選10萬(wàn)克隆，效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)傳統(tǒng)孔板篩選技術(shù)。最終項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)對(duì)常壓室溫等離子體（ARTP）誘變的解淀粉芽孢桿菌全基因組突變文庫(kù)進(jìn)行超高通量篩選，成功獲得了一株谷氨酰胺酶產(chǎn)量提高47%以上的突變株。該篩選平臺(tái)，與微孔板篩選系統(tǒng)相比，篩選率提高500倍，試劑用量減少2萬(wàn)倍，并且可以節(jié)省大量的多孔板、培養(yǎng)皿、槍頭等耗材。
  研究團(tuán)隊(duì)所使用的液滴微流控細(xì)胞分選儀（DREM cell）是天木生物基于液滴微流控技術(shù)開(kāi)發(fā)的皮升級(jí)液滴微流控單細(xì)胞分選平臺(tái)，可將待篩選細(xì)胞進(jìn)行包被形成單細(xì)胞微液滴，結(jié)合熒光篩選模型，可以在細(xì)胞水平完成微生物的高通量分離、培養(yǎng)、檢測(cè)、分選等。
高通量皮升級(jí)液滴單細(xì)胞分選系統(tǒng)（DREM cell）相比于傳統(tǒng)篩選方法，篩選效率可提升1萬(wàn)倍，試劑消耗量可下降至百萬(wàn)分之一，在篩選通量顯著提升的同時(shí)，單克隆篩選成本大幅度降低。該儀器不僅可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞等的高通量篩選，還可以應(yīng)用于蛋白、核酸、抗體等生物大分子篩選等相關(guān)研究領(lǐng)域。