液體閃爍計數(shù)器與分光光度計測定蛋白含量的比較研究

 

蛋白質(zhì)含量的比色測定，是在分光光度計上完成的。1983年Noble用液體閃爍計數(shù)器(液閃儀)測定蛋白含量。l988年強美玉做了分光光度計測定濃度范圍內(nèi)的研究。我們用Lowry和Bradford蛋白含量測定法，對液閃儀和分光光度計測定蛋白濃度范圍，準確度，重復(fù)性和穩(wěn)定性進行了比較研究。并用液閃儀測定了102份人精漿蛋白和31份人血清蛋白樣品。

 

1．1儀器FJ-2107型液閃儀(西安二六二廠)
260型可見紫外分光光度計(日本島津)。

1．2密封放射源在直徑0．3cm，長3cm的玻管內(nèi)加入H-雌二醇和甲苯閃爍液，燒封管口。平均放射計數(shù)為60016±120／6秒(n=15)。

1．3蛋白測量裝置將3ml顯色后的蛋白測定液置于測量套瓶中，放射源微管豎插于被測液中，測量套瓶放人閃爍瓶內(nèi)。

1．4液閃儀測定蛋白含量的原理放射源產(chǎn)生的光子，被有色的蛋白測定液淬滅，淬滅程度與蛋白濃度成比例。制備放射計數(shù)對蛋白濃度的標準曲線，即可進行蛋白定量測定。

 

2．1標準曲線Lowry(藍色)和Brdaford(棕色)測定液，低濃度時，液閎儀和分光光度計測定標準曲線均為直線。隨著蛋白濃度的增加，標準曲線彎曲，改用放射計數(shù)對蛋白濃度的對數(shù)作圖，標準曲線呈直線。放射計數(shù)與蛋白濃度，藍色測定液成正比，棕色測定液成反比。

 

2．2液閃儀與分光光度計測定蛋白濃度范圍比較。液閃儀比分光光度計測定蛋白濃度范圍寬12倍(藍色)和60倍(棕色)。見表1。

 

2．3液閃儀與分光光度計測定準確度比較標準蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計測1o次，其均值與標準蛋白濃度比較。見表2。

 

2．4液閃儀與分光光度計測定重復(fù)性比較低和高濃度蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計測定，以批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV)比較。見表3。

 

2．5液閑儀與分光光度計測定穩(wěn)定性比較標準蛋白液顯色后于不同時間內(nèi)用液閃儀和分光光度計測定放射計數(shù)和吸光度。低濃度，8小時內(nèi)無顯著性差異(>0．05)；高濃度24小時內(nèi)無顯著性差異(P>0．05)。

 

2．6液閃儀與分光光度計測人精漿蛋白含量比較102份人精漿蛋白(I—owry)~31份人血清蛋清(Bradford法)顯色，液閃儀和分光光度計測定的蛋白含量值相關(guān)良好(r=0.974)，配對t檢驗無顯著性差異(P>O．05)，見表5。

 

我們的結(jié)果顯示，液閃儀測定蛋白的濃度范圍比分光光度計寬l2～60倍，測定的重復(fù)性、穩(wěn)定性和準確度可與分光光度計媲美。我們改進Noble法：①改測定裝置使測定液由16ml減到3ml；③改用能量低、價格低，效果好的。H放射源；③對高濃度曲線進行了對數(shù)轉(zhuǎn)換，實現(xiàn)了高濃度蛋白樣品的準確測定。我們利用現(xiàn)代液閃儀先進的樣品和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，使測定簡單、準確、自動化，同時叉拓寬了液閃儀的用途。