Eppendorf 蛋白質(zhì)核酸自動(dòng)分析儀操作說(shuō)明與注意事項(xiàng)

操作說(shuō)明：
準(zhǔn)備：開始測(cè)定前只需開啟儀器背后的電源開關(guān)即可開始測(cè)定，無(wú)需預(yù)熱。
  一、核酸濃度測(cè)定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo）
  1. 例如待測(cè)定樣品為dsDNA（eg：PCR產(chǎn)物），按下鍵“7 / dsDNA”
  （若待測(cè)樣品為ssDNA，eg：反轉(zhuǎn)錄合成的第一鏈cDNA產(chǎn)物，則相應(yīng)按下鍵“8 / ssDNA”；
  若待測(cè)樣品為RNA，則按下鍵“9 / RNA”；
  若待測(cè)樣品為Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，則相應(yīng)按下鍵“6 / Oligo”。）
  2. 將空白對(duì)照置入樣品孔。注意：空白對(duì)照是空白液，并非所有情況都是水。（例如用Tris溶液溶解DNA制品，則要用Tris液做空白對(duì)照。）
  3. 按下鍵“Blank”；
  4. 儀器記錄空白對(duì)照，設(shè)置為0.000A；
  5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔；
  6. 按下“Sample”；
  7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值，以及其他相關(guān)參考比值；
  8. 直接放入第二個(gè)樣品；
  9. 按下“Sample”；
  10. 儀器顯示第二個(gè)樣品的吸光度值和濃度值，以及其他相關(guān)參考比值；
  11. 依次測(cè)定，每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中，查看測(cè)定結(jié)果的方法如下：
  （1）按下鍵“./ Function”
  （2）選擇“DISPLAY-RESULT”,按Enter鍵，查看每個(gè)樣品的測(cè)定值記錄（本機(jī)可存儲(chǔ)100個(gè)樣品的測(cè)定值）。
  設(shè)定樣品的稀釋度
  （1）按下鍵“Dilution”；
  （2）輸入樣品體積和稀釋液體積，按Enter鍵確認(rèn)。 
 
 
二、蛋白質(zhì)濃度的直接測(cè)定（280nm測(cè)定）
  1. 按下鍵“4 / Protein”；
  2. 將空白對(duì)照置入樣品孔；
  3. 按下鍵“Blank”；
  4. 儀器記錄空白對(duì)照，設(shè)置為0.000A；
  5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔；
  6. 按下“Sample”；
  7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值，以及其他相關(guān)參考比值；
  8. 依次測(cè)定，每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中，可查看測(cè)定結(jié)果。
  
三、蛋白質(zhì)濃度顯色法的間接測(cè)定（Bradford，Lowry， BCA）
  1. 按下鍵“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”選擇蛋白質(zhì)顯色反應(yīng)的方法；
  注：Bradford鍵按兩次，每次顯示不同的測(cè)定范圍。
  2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)量、測(cè)定次數(shù)和濃度范圍。按下鍵“Parameter”用上下鍵 進(jìn)行選擇和參數(shù)調(diào)整。
  3. 將空白對(duì)照置入樣品孔；
  4. 按下鍵“Blank”；
  5. 儀器記錄空白對(duì)照，設(shè)置為0.000A；
  6. 將第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品（如需沿用已存儲(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可直接測(cè)樣品）置入樣品孔；
  7. 按下“Sample”或“Standard”；
  8. 依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中，查看測(cè)定結(jié)果。
  
四、OD600 細(xì)菌生長(zhǎng)密度測(cè)定
  1. 按下鍵“5 /OD 600”；
  2. 將空白對(duì)照置入樣品孔；
  3. 按下鍵“Blank”；
  4. 儀器記錄空白對(duì)照，設(shè)置為0.000A；
  5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔；
  6. 按下“Sample”；
  7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值；
  8. 依次測(cè)定，每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中，查看測(cè)定結(jié)果。
  
五、注意事項(xiàng)：
  1  為了盡量減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1－1.5A。在此范圍內(nèi)顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。樣品的濃度不能過(guò)低或者過(guò)高。
  2  混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；
  3  混合液中不能有氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；
  4  必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則測(cè)定濃度結(jié)果差異太大；
  5  換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇要一致；
  6  不能采用窗口磨損的比色杯；
  7  樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積（50ul）；
  8  通常濃度的樣品可以用10 mm光程長(zhǎng)度進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于高濃度的樣品，只需將比色皿旋轉(zhuǎn)90°，使用稍短的2 mm光徑進(jìn)行檢測(cè)。