RealTime ready自由定制您的qPCR 檢測(cè)方法

瀏覽次數(shù)：4167　發(fā)布日期：2010-6-7　來(lái)源：Roche

RealTime ready自由定制您的 qPCR 檢測(cè)方法

讓多重基因定量不再受約束

RealTime ready qPCR 分析方法是羅氏診斷公司應(yīng)用科學(xué)部于2010年最新推出的即用型qPCR定制檢測(cè)方法，可快速靈敏地一次性定量6-384個(gè)基因的表達(dá)情況。您可于免費(fèi)的RealTime ready 在線配置工具上，自由選擇人類相關(guān)靶基因并進(jìn)行定制型多孔檢測(cè)板的配置。除了通過(guò)基因名稱搜索，您還可以直接從信號(hào)通路或功能基因組中直觀地選擇靶基因，整個(gè)定制過(guò)程就像您在網(wǎng)上購(gòu)物一般，隨心所欲，簡(jiǎn)單便捷。

檢測(cè)技術(shù)

RealTime ready 檢測(cè)基于羅氏獨(dú)有的通用水解探針庫(kù)Universal ProbeLibrary (UPL) 技術(shù)。UPL 探針是短序列的水解探針，5’ 末端標(biāo)記熒光素(FAM)，3’ 末端標(biāo)記淬滅染料。根據(jù)短片段序列在生物基因組中的高重復(fù)特性，每個(gè)探針可與接近 7000 個(gè)轉(zhuǎn)錄子結(jié)合，每個(gè)轉(zhuǎn)錄子可被約 16 個(gè)不同的UPL探針?biāo)鶛z測(cè)到。因此，僅需要165條短的水解探針，即可覆蓋約99%的人類、小鼠、大鼠、果蠅、擬南芥等常見(jiàn)模式生物的基因組。為保持qPCR 探針雜交至模板DNA上所需的特異性及熔解溫度，特有的Locked Nucleic Acids (LNA) 結(jié)構(gòu)被整合入每條 UPL 探針序列中 (圖 3)。因此，標(biāo)準(zhǔn) PCR 條件下，高度特異性的 RealTime ready 檢測(cè)可用于所有實(shí)時(shí)熒光 PCR 系統(tǒng)中。

RealTime ready qPCR 分析方法

每種 RealTime ready qPCR 分析方法均含有對(duì)應(yīng)于您的靶基因的特異性引物及UPL水解探針。每種分析方法在設(shè)計(jì)后都使用通用生物學(xué)樣品材料，以標(biāo)準(zhǔn)PCR條件在LightCycler® 480上進(jìn)行過(guò)測(cè)試。

每種分析方法都能滿足以下嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)：

n 線性動(dòng)態(tài)范圍至少為 3 個(gè)數(shù)量級(jí)。

n PCR 擴(kuò)增效率為 2.0 ± 0.2。

n 標(biāo)準(zhǔn)曲線 R² 值為 0.99 至 1.00。

n 擴(kuò)增特異性高，凝膠分析中無(wú)副產(chǎn)物生成。

正如所有 UPL 檢測(cè)，RealTime ready 檢測(cè)可成功用于所有實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀上。由于僅需加入模板和預(yù)混液，RealTime ready可以大量節(jié)省您合成引物和熒光探針?biāo)璧臅r(shí)間，并且一次性完成您任意定制的靶基因組合的檢測(cè)，可以獲得大量有特別針對(duì)性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，非常適合用于表達(dá)譜芯片的下游驗(yàn)證等中等通量，且具有明確目標(biāo)性的應(yīng)用。

免費(fèi)的在線設(shè)計(jì)工具

可使用在線的免費(fèi)軟件Probe Finder進(jìn)行 RealTime ready 分析方法設(shè)計(jì)。有以下三種靶基因的導(dǎo)入方式。

“Search by Keyword”支持通過(guò)基因名稱、基因標(biāo)志、公共訪問(wèn)標(biāo)識(shí)、生物學(xué)過(guò)程、蛋白功能或最多 5 個(gè)關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索。通過(guò)“Batch Upload”功能，可最多進(jìn)行384個(gè)不同訪問(wèn)標(biāo)識(shí)的搜索。

“Search by Pathway”從細(xì)胞信號(hào)通路的直觀圖示中進(jìn)行檢測(cè)目標(biāo)的選擇。

“Search by Focus Panel”從大型基因家族如 GPCR、蛋白激酶，或功能相關(guān)群組如轉(zhuǎn)錄因子或離子通道等的預(yù)選擇列表中進(jìn)行檢測(cè)目標(biāo)選擇。

凝膠分析中未檢測(cè)出副產(chǎn)物

圖 1：應(yīng)用RealTime ready 檢測(cè)48個(gè)人類 GPCR 家族的基因。

5個(gè)數(shù)量級(jí)稀釋檢測(cè)擴(kuò)增線性，顯示PCR效率為99.2 至 100 %。

圖 2：對(duì)12 個(gè)人凋亡信號(hào)通路檢測(cè)，均進(jìn)行5個(gè)數(shù)量級(jí)稀釋并作線性圖（Cp vs 對(duì)數(shù)濃度）。

圖 3：UPL 探針整合入 LNA 核苷酸.

Locked Nucleic Acids 是一類核苷酸類似物，可增強(qiáng)堿基堆積及骨架重組結(jié)構(gòu)，顯著增強(qiáng)核酸分子的熱穩(wěn)定性及雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

針對(duì) LightCycler® 480 實(shí)時(shí)熒光PCR系統(tǒng)的RealTime ready 定制型

多孔檢測(cè)板

LightCycler® 480 Multiwell Plates 96 或 384 孔定制型多孔檢測(cè)板可根據(jù)您的需要進(jìn)行 RealTime ready 方法選定。有大量不同的配置板式（圖 4、5）可用。96 孔板預(yù)置及干燥處理后，支持PCR反應(yīng)容積為 20μl，384 孔板為 10ul；檢測(cè)時(shí)僅需添加 cDNA 與 RealTime ready DNA Probes Master，即可快速獲得檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠。

每塊板最多保留3個(gè)孔用于您所選定的內(nèi)參基因檢測(cè)。而且，大多數(shù)板式的布局格式均

具有預(yù)置的誤差檢測(cè)的設(shè)定。

當(dāng)然，您也可以訂購(gòu)單個(gè)基因的分析方法，由羅氏為您設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)的 RealTime ready Assay。

您也可以訪問(wèn)www.realtimeready.roche.com，通過(guò)觀看簡(jiǎn)短的視頻演示獲取詳細(xì)信息。

圖 4：RealTime ready Custom Panel 96-16+

圖 5：RealTime ready Custom Panel 384-64+

來(lái)源：羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司
聯(lián)系電話：800-820-8864 400-820-8864
E-mail：china.lifescience@roche.com

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