Flag標(biāo)簽抗體在免疫沉淀IP&免疫熒光IF中的應(yīng)用

Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是已被公認(rèn)的用于表達(dá)、純化以及檢測融合蛋白的表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于Western blotting、免疫細(xì)胞組化、免疫共沉淀、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個(gè)研究領(lǐng)域。Flag標(biāo)簽是一個(gè)與重組蛋白相融合的由 8個(gè)親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標(biāo)簽只有8個(gè)氨基酸組成，因此它不會占據(jù)其他表位與結(jié)合域，避免導(dǎo)致融合蛋白的功能、分泌性以及轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生改變。由于它的親水性特點(diǎn)，F(xiàn)lag標(biāo)簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結(jié)合以及被腸激酶酶解。

如何選擇合適的Flag標(biāo)簽抗體？

我們在選擇Flag抗體時(shí)，主要根據(jù)自己的需要，特別是實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的需要。另外，一個(gè)抗體檢測后的應(yīng)用類型越多，在使用過程中的選擇余地就越大；而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價(jià)都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外，抗體的效價(jià)也是考察該抗體性價(jià)比的重要方面，也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl Flag抗體（假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000，最終使用液相當(dāng)于500ml），要比效價(jià)低的1ml的Flag抗體（假如WB檢測的稀釋比率是 1:200，最終使用液相當(dāng)于2ml）性價(jià)比更高。

Abbkine的Flag標(biāo)簽抗體的效價(jià)有點(diǎn)超出意料。做WB實(shí)驗(yàn)時(shí)，第一次按照說明書推薦的1:1000，顯示的條帶很強(qiáng)，后來不斷的稀釋摸索條件，1:10000稀釋的時(shí)候做WB條帶仍然是很不錯(cuò)的。 ——中山大學(xué)醫(yī)學(xué)部一客戶

為什么推薦Abbkine品牌的Flag抗體？

Flag系統(tǒng)是Sigma-Aldrich^®擁有的系統(tǒng)，因此Sigma的Flag標(biāo)簽抗體是之前諸多客戶的選擇。Sigma的Flag標(biāo)簽抗體主要有M1和M2兩種克隆號的抗體，其中M1克隆號的Flag抗體可用于檢測Flag標(biāo)簽位于N末端的重組蛋白，而M2克隆號的Flag單克隆抗體則可以檢測幾乎所有的Flag標(biāo)簽蛋白。其2010年的中國報(bào)價(jià)分別為￥4649/200μg和￥3683/200μg。

假如您想選擇一款性價(jià)比更高的Flag標(biāo)簽抗體，那Abbkine可能是另一個(gè)優(yōu)先選擇，其價(jià)格比Sigma要低30%左右。Abbkine的Flag標(biāo)簽抗體 Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody（貨號#A02010）可以用于檢測和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達(dá)蛋白（包括N末端、C末端）等。該Flag抗體為小鼠源單克隆抗體，其免疫原為KLH偶聯(lián)的Flag標(biāo)簽（DYKDDDDK）多肽。另外，Abbkine還同時(shí)提供經(jīng)HRP偶聯(lián)的Flag標(biāo)簽抗體，尤其適合IP-WB驗(yàn)證時(shí)去除二抗的干擾；兔源多克隆Flag抗體也為客戶提供另一種Flag標(biāo)簽的檢測方案。

Abbkine的Flag單克隆標(biāo)簽抗體不僅能應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)定位的IF實(shí)驗(yàn)，同樣還能應(yīng)用于IP實(shí)驗(yàn)。1:200甚至更高的IP實(shí)驗(yàn)稀釋比率，也說明了該抗體本身的具有很高的效價(jià)，同時(shí)，因?yàn)槭菃慰寺】贵w，因此特異性也很高。高效價(jià)所對應(yīng)的高稀釋比率也意味著高性價(jià)比。對于WB實(shí)驗(yàn)，其說明書的推薦起始稀釋比例是1:1000，但在在1:5,000的稀釋比率下也表現(xiàn)優(yōu)異（Abbkine也進(jìn)行了10,000次以后的稀釋，仍然顯示出很好的條帶顯示，沒有在說明書里列出）。下圖為Abbkine的Flag抗體的應(yīng)用圖示。

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一個(gè)高效價(jià)的抗體不僅影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的靈敏度，還意味著更高的性價(jià)比。Abbkine的Flag標(biāo)簽抗體（貨號#A02010）在常規(guī)的WB實(shí)驗(yàn)里， 推薦的起始稀釋比率為1:1000，實(shí)際在Abbkine的應(yīng)用中，還有1:10,000甚至更高的稀釋比率，需要根據(jù)客戶具體的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行進(jìn)行優(yōu)化。

Abbkine還提供大包裝1ml的Flag標(biāo)簽抗體，非常適合經(jīng)常進(jìn)行His標(biāo)簽系統(tǒng)免疫學(xué)檢測的實(shí)驗(yàn)需求。為方便客戶的使用， 上述產(chǎn)品，Abbkine均在中國備有現(xiàn)貨。Abbkine針對中國市場，提供全球化的產(chǎn)品質(zhì)量追蹤和售后服務(wù)以及保障，如果您在使用過程中有任何問題， 請直接與其當(dāng)?shù)卮�理商艾美捷科技有限公司�?lián)系。