細胞計數(shù)和活力測定實驗方法

器材和試劑： 
1. 倒置相差顯微鏡，具有10×物鏡；
2. 標(biāo)注體積刻度的試管（圓錐形底）；
3. 改良的Neubauer血細胞計數(shù)器；
4. 計數(shù)器蓋玻片；
5. 袖珍管或等體積的塑料容器，如試管或離心管；
6. 巴斯德吸管（短型和長型）；
7. 可調(diào)體積的微量加樣器（100—250μl）；
8. 無菌槍尖；
9. 無菌刻度吸管（1—10ml）、洗耳球或自動移液裝置；
10. 10g/L臺盼藍；
11. Hanks平衡鹽溶液或儲存培養(yǎng)基；

實驗方法：
1. 準備計數(shù)器。輕輕地濕潤中央網(wǎng)絡(luò)區(qū)域的各個邊，用兩個拇指的壓力使蓋玻片水平地從邊緣滑動。當(dāng)在中央標(biāo)記區(qū)臨近的任何一邊能看見牛頓環(huán)（彩虹色）時，蓋玻片位置正確；
2. 1000r/min離心細胞懸液5min，棄上清。將細胞重懸于已知體積的培養(yǎng)基中；
3. 用巴斯德吸管來回吹打細胞懸液幾次，混勻，確定細胞均勻分散；
4. 用微量加樣器吸取250μl混勻的細胞懸液，轉(zhuǎn)入袖珍管。用一個干凈的加樣器尖吸取等體積臺盼藍溶液加入細胞懸液中。用拇指和食指快速輕彈袖珍管幾次使之混勻。立即用一個巴斯德吸管尖吸取一滴細胞懸液，輕輕地將其滴在臨近計數(shù)區(qū)的蓋玻片邊緣上。毛細作用使細胞懸液移到蓋玻片下面，填滿中央和邊緣溝之間的區(qū)域。在蓋玻片的另一邊重復(fù)該操作；
5. 將計數(shù)器放于顯微鏡載物臺上，移動載物臺直到將三條平行線界定的25個小方格的網(wǎng)格位于中央為止。計25個小方格內(nèi)的總細胞數(shù)（染色和未染色的）（它們每一個又再分為16個更小的方格便于計數(shù)）。為了避免將同一個細胞重復(fù)計數(shù)，只數(shù)三線隔開的壓上線、左手線和中央?yún)^(qū)的細胞。如果細胞數(shù)大可用一個計數(shù)器；
6. 數(shù)完總細胞數(shù)時，在相同區(qū)域重復(fù)計數(shù)，只數(shù)藍染（死）的細胞。計算死細胞的平均數(shù)，從總細胞數(shù)中扣除死細胞數(shù)得到活細胞數(shù)；
7. 應(yīng)用以下公式計算細胞群的存活率：
存活率=活細胞數(shù)/（活細胞數(shù)+死細胞數(shù)）×100%
8. 細胞懸液的細胞濃度按照一下方法計算：
1個大格（25個小格）的平均細胞數(shù)×10⁴=細胞數(shù)/ml
9. 細胞懸液總細胞數(shù)=細胞數(shù)/ml×總體積
10. 細胞懸液總的活細胞數(shù)=總細胞數(shù)×存活率（%）