密度阻滯法純化人外周血單核細(xì)胞

試劑和器材： 
1. 抗凝血劑：100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉；
2. Hepes緩沖生理鹽水（HBS）：8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
3. 淋巴細(xì)胞分離液（例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077）或OptiPrepTM，用Hepes緩沖生理鹽水稀釋（分別加入5倍體積和17倍體積）；
4. 臺式低速離心機(jī)；
5. 巴斯德吸管（短型和長型）；
6. 5—10ml規(guī)格注射器和金屬套管針；

實驗方法：
1. 用乙二胺四乙酸（2mmol/L終濃度）或檸檬酸鈉（38g/L終濃度）作為抗凝劑來收集靜脈血；
2. 用等體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋血液，反復(fù)多次輕輕顛倒；
3. 用塑料巴斯德吸管，取6ml稀釋過的血液加入到離心管中3ml的選定介質(zhì)之上；
4. 20℃，以700g離心15min（LymphoprepTM）或700g離心20min（NycoPrepTM1.077或碘克沙醇溶液）；
5. 用緩慢減速程序或不制動的方法使轉(zhuǎn)子減速；
6. 用巴斯德吸管在界面上收集細(xì)胞；
7. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋并且以200g—500g離心15min收集細(xì)胞；