脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA試劑盒使用說明

（德國IBL進(jìn)口原裝，貨號(hào)：RE56921）

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脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體ELISA試劑盒可用于血清和血漿中抗脊髓灰質(zhì)炎特異性IgG抗體的定量檢測。此試劑盒也可用來檢測其它體液，您可從IBL公司獲取技術(shù)支持。此試劑盒僅供體外診斷用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果從來都不可以作為醫(yī)學(xué)報(bào)告的唯一依據(jù)，醫(yī)學(xué)報(bào)告還得考慮病人病史和進(jìn)行進(jìn)一步的檢測。

脊髓灰質(zhì)炎是一種由腸道病毒引起的傳染病，它廣泛流行于世界各地，并常常導(dǎo)致病人癱瘓和死亡。人類目前知道的人致病性脊髓灰質(zhì)炎有三種類型：

1類（Brunhilde）：通常會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的癥狀。

2類（Lansing）：出現(xiàn)稍微溫和的癥狀。

3類（Leon）：少，但伴隨嚴(yán)重癥狀。

脊髓灰質(zhì)炎病毒主要增生擴(kuò)展在腸道的淋巴節(jié)內(nèi)，并通過糞便排泄出去。咽喉也可能會(huì)感染脊髓灰質(zhì)炎病毒，之后病毒就會(huì)遺留在人體口腔內(nèi)。人感染脊髓灰質(zhì)炎后，病毒就可以通過單核細(xì)胞分布到其它淋巴節(jié)，之后在淋巴節(jié)繁殖成各種各樣的脊髓灰質(zhì)炎病毒。在第二個(gè)viremic階段，病毒就停留在所有的器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰質(zhì)炎的病人都不會(huì)出現(xiàn)任何主觀癥狀。在其它剩余的病例中會(huì)出現(xiàn)：伴隨低燒的非特異性疾病、頭痛和喉嚨發(fā)炎、痢疾、惡心和嘔吐。伴隨有肌肉疼痛和大腦神經(jīng)的經(jīng)典麻痹癥非常少見。再次康復(fù)階段要持續(xù)兩年，而且常常會(huì)出現(xiàn)持久的破壞。脊髓灰質(zhì)炎目前還沒有治療方法，僅用阿司匹林和體操的對癥治療會(huì)有些效果。在亞洲地區(qū)的很多國家中，脊髓灰質(zhì)炎仍然是地方性的，但WHO已開始了巨大的工程來根除此疾病。在歐洲會(huì)有因旅游者帶進(jìn)的脊髓灰質(zhì)炎病例存在，有時(shí)候還是致命性的。在病毒潛伏期，通過檢測糞便或咽喉沖洗物中的傳染原或檢測血液中的抗體可診斷脊髓灰質(zhì)炎。血液抗體的檢測通常是通過中和檢測進(jìn)行的，雙份血清檢測有滴度差異，所以三種類型脊髓灰質(zhì)炎病毒必須分別檢測。最近，脊髓灰質(zhì)炎IgG ELISA實(shí)驗(yàn)用類似白喉和百日咳的方法進(jìn)行了改進(jìn)，這種新的ELISA試劑盒可同時(shí)檢測三種類型的脊髓灰質(zhì)炎病毒。這種血清學(xué)反應(yīng)是由既往感染或免疫接種所導(dǎo)致的。

脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測試劑采用酶聯(lián)免疫的原理。脊髓灰質(zhì)炎抗原包被在包被板板條的微孔上。在包被板的微孔中加入稀釋好的病人血清或即用型的標(biāo)準(zhǔn)品，之后血清中的IgG抗體會(huì)結(jié)合到固相脊髓灰質(zhì)炎抗原上。室溫下溫育1小時(shí)后，用洗滌液洗板除去未結(jié)合的物質(zhì)。之后加入過氧酶標(biāo)記的即用型抗人IgG，溫育30分鐘。之后再洗板，洗板后加入TMB底物液并溫育20分鐘，此時(shí)溶液變成藍(lán)色。加入終止液終止酶反應(yīng)，溶液又藍(lán)色變成黃色，450nm處檢測OD值。IgG抗體的濃度與溶液所顯示的顏色強(qiáng)度成正比。

將試劑盒儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下，有效期（標(biāo)記在標(biāo)簽上面）內(nèi)穩(wěn)定。使用前，將所有成分平衡至室溫（18-25℃）。不用的板條應(yīng)當(dāng)重新密封好，試劑瓶的蓋子要蓋好，并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。打開了的試劑盒必須在三個(gè)月內(nèi)用完。

按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項(xiàng)采集樣品，血液樣品自采集到實(shí)驗(yàn)時(shí)都必須保證其化學(xué)完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品�；鞚岬臉悠窇�(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)開始前離心以除去所有的顆粒性物質(zhì)。
儲(chǔ)存	2-8℃	≤-20℃	避免太陽直射，避免反復(fù)凍融。
穩(wěn)定性	48小時(shí)	＞48小時(shí)

 

 

1）  5ul，100ul和500ul的多道移液器。

2）  可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀。

3）  洗板機(jī)

4）  用于血清稀釋的試管

5）  蒸餾水

 

8.1成分的準(zhǔn)備

8.2樣品的稀釋

如果樣品中的IgG濃度比最高標(biāo)準(zhǔn)品的都要高，則樣品必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。

 

    嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則或其它實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。就如試劑瓶標(biāo)簽所述：所有的控制品都必須建立在一個(gè)可以接受的范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求，那么實(shí)驗(yàn)則無效，必須重做。為了能進(jìn)一步研究，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都必須知道所有的樣品。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果，應(yīng)檢查以下參數(shù)：試劑有效期，貯存條件，取樣器，實(shí)驗(yàn)設(shè)備，溫育時(shí)間，清洗方法。

平均OD值是檢測OD值減去空白孔數(shù)值之后的平均值，兩孔間數(shù)值的差異不能超過10%。

上面表格只是個(gè)例子，所有數(shù)值都是當(dāng)時(shí)的溫度和條件下獲得的，因此上述數(shù)值不能當(dāng)作參考值，參考值必須從其它實(shí)驗(yàn)室去獲取。

13.1定量評價(jià)

脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體檢測試劑盒的即用型標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品用的是一個(gè)專門的單位進(jìn)行定義表述的（U/ml）。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確并且可以重復(fù)定量評價(jià)的話，則結(jié)果有可能可以作為后續(xù)病人的質(zhì)控品。質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的濃度請見試劑瓶標(biāo)簽。定量檢測時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的OD值對其濃度在坐標(biāo)紙上進(jìn)行標(biāo)繪，之后每一病人樣品的濃度值可以用其OD值從此參考曲線上定量得到。我們可以用計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)計(jì)算記過，濃度計(jì)算時(shí)，樣品的稀釋因子要重新被考慮進(jìn)去。

將弱陽性質(zhì)控重復(fù)檢測10次可以得到脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG試劑盒的板內(nèi)差異，其板內(nèi)差異小于10%。

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。

 

 

 

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