生物分析中蛋白質(zhì)、多肽及寡聚核苷酸樣品制備、除鹽耗材介紹

 

LC-MS是蛋白質(zhì)表征的強有力工具。反向HPLC/UPLC液相分離和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是最常用的分離模式，這種分離模式也是蛋白質(zhì)除鹽的有效方法。生物制品及蛋白質(zhì)溶液經(jīng)常儲存在一定鹽離子濃度的緩沖溶液中，如PBS(磷酸鹽緩沖溶液)。這些鹽溶液，能和蛋白質(zhì)形成加和離子，使數(shù)據(jù)解析更加復(fù)雜，同時，這些鹽類也抑制了ESI-MS分析時的離子化效率。因此，質(zhì)譜分析之前，蛋白質(zhì)的非揮發(fā)性鹽類的去除是重要的一步。沃特世公司的MassPREP^TM 在線脫鹽小柱（2.1X10 mm，Part  number186004032）為客戶提供了簡單易行，快速（小于5分鐘的液相梯度，如圖1），及重現(xiàn)性高的有效脫鹽方法[1]。并成功應(yīng)用于12KDa~150KDa分子量范圍的完整蛋白質(zhì)的脫鹽LC-MS分析（如圖2）展示了這種除鹽柱用在細胞色素 C（分子量約12KDa），牛血清白蛋白BSA(分子量約62KDa)，和IgG（分子量約150KDa）的除鹽效果，而且柱容量可高達10微克^[2,3,4]。

 

 

 

在蛋白質(zhì)肽段及寡聚核苷酸的除鹽分析方面，沃特世的OASIS HLB(Hydrophili Lipohilic Balance) 96-孔微洗脫板（Part  number 186001828），是以親水（20%N-乙烯吡咯烷酮）-親脂性（80%二乙烯基苯）共聚體為填料的固相萃取96孔板^[5]。乙烯吡咯烷酮使填料具有水的可浸潤性，二乙烯基苯具有反向保留能力，所以此款產(chǎn)品對酸性和堿性的蛋白質(zhì)多肽及寡聚核苷酸均具有更高的選擇性和靈敏度-即便填料在吸附過程中干涸也不例外^[5]。用此款產(chǎn)品對蛋白質(zhì)多肽及寡聚核苷酸進行LC-MS/MS分析前的脫鹽處理，可以極大降低LC-MS/MS分析的機制效應(yīng)，提高檢測靈敏度，而且其pH應(yīng)用范圍寬至1-146。OASIS HLB96-孔微洗脫板吸附寡聚核苷酸的柱容量從1pmol高至5000 pmol。

 

(1) Waters Instrucion Sheet of UPLC Intact Mass AnalysisApplication Kit, November 2007, 715001664 Rev A VW-PDF.

(2) T homas E. W., Paul R. R., Beth L. G., Ziling Lu, Laetitia C.,Jeffrey R. M., Fast On-Line Desalting of Proteins for Determination of Structural Variation Using Exact Mass Spectroscopy, 2007, Vol.6,No.1: 55-59.

(3) T homas E. W., Paul R. R., Beth L. G., Ziling Lu, Laetitia C.,Jeffrey R. M., Fast On-Line Desalting of Proteins for Determination of Structural Variation Using Exact Mass Spectroscopy, Waters Application notes, June 2009, 720002292EN, LB-UM.

(4) Paul D. R., T homas E. W., Desalting of Proteins Using MassPREP^TMOn-Line Desalting Cartridges Prior to Mass Spectrometery.Waters Application notes, 720001077EN.

(5) 沃特世2011/2012液相色譜柱及消耗品簡要指南，7-11.

(6) Martin G., Alexei B., Bing H. Wang, High-t hroughput biopolymer desalting by solid-p hase extraction prior to mass spectrometric analysis, 2001, Journal of Chromatography A, 921:3–13.