乳制品中雙氰胺測定的沃特世整體解決方案

丁娟娟、紀英華、王冰、蔡麒
沃特世科技（上海）有限公司

摘要
2013年1月，新西蘭牛奶及奶制品被檢測出含有少量的有毒物質雙氰胺，新西蘭政府已經(jīng)下令禁售含有雙氰胺的奶類產(chǎn)品。由于中國是新西蘭奶制品的出口大國，所以這一敏感的食品安全問題又一次觸動了全中國人民的心。沃特世（Waters^®）公司第一時間推出完整解決方案，為廣大客戶提供有力的分析手段。二氰二氨（俗稱雙氰胺），縮寫DICY或DCD，是氰胺的二聚體，也是胍的氰基衍生物�；瘜W式C₂H₄N₄，白色結晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，幾乎不溶于醚和苯。不可燃，干燥時穩(wěn)定。

分析難點
雙氰胺極性非常大，傳統(tǒng)C₁₈色譜柱及HILIC色譜柱均難以保留，對于復雜的奶制品基質來說會與雜質共流出，影響分析目標化合物的定量和定性。沃特世公司BEH Amide系列色譜柱通過三鍵鍵合的酰胺基鍵合相，親水作用色譜的原理，使得雙氰胺得到非常好的保留。

實驗方法
一、樣品前處理方法：
取1g奶粉加10mL 1%三氯乙酸溶解并沉淀蛋白，12,000轉高速離心10min；取2mL上清液上樣到SepPak^® AC2小柱上（Sep-pak AC2上接30mL儲液器，wat011390），按照如下流程操作。方法回收率91%。

二、儀器方法:
UPLC^® 方法：
儀器： ACQUITY UPLC^®
流動相A： 0.05%乙酸水
流動相B： 0.05%乙酸乙腈
色譜柱： BEH Amide 2.1×150 mm 1.7 μm
流速： 0.3 mL/min
柱溫： 30℃
進樣體積： 5 μL
梯度曲線：

MS參數(shù)：
毛細管電壓： 3.5 kv
脫溶劑氣溫度： 400 ℃
脫溶劑氣流速： 900 L/hr
碰撞氣流速： 0.2 mL/min

檢測過程中發(fā)現(xiàn)，乳制品基質即使做過凈化處理，背景干擾依然很嚴重，所以在檢測過程中開啟RADAR功能，實時監(jiān)測雜質對目標化合物的干擾及背景基質的影響。

 

此圖為同時檢測目標化合物的多反應檢測通道及基質全掃描圖，目標化合物雙氰胺出峰時間背景干擾不明顯，使離子抑制效應減到最低。

檢測利器2——PICs功能（子離子確認掃描）
在檢測目標化合物的時候發(fā)現(xiàn)，物質本身分子量小，乳制品中干擾物質多，干擾嚴重，不可避免地會出現(xiàn)假陽性的情況，此時會選擇高分辨質譜進行分子量和結構的剖析，沃特世Xevo^®系列串聯(lián)四極桿質譜可提供碎片離子信息，使一次進樣即可完成化合物的多重定性。

由圖中可以看出，溶劑標準品和奶粉樣品的PICs質譜圖中主要碎片離子相同，各碎片離子之間相對強度比也在誤差范圍內，擬合度匹配良好，可以確認是陽性樣品。這樣對于只提供兩對離子對比的單一定性方法來說多了一種定性功能，使數(shù)據(jù)更加準確。

結論
雙氰胺極性非常大，傳統(tǒng)C₁₈色譜柱及HILIC色譜柱均難以保留，而沃特世公司Amide系列色譜柱通過三鍵鍵合的酰胺基鍵合相，親水作用色譜的原理，使得雙氰胺得到非常好保留。而儀器對于復雜基質中殘留物的分析又作了更好的詮釋，例如用于實時檢測背景基質干擾的RADAR功能及多重定性選擇的PICs功能，都能很好地應用在我們的實際工作中，使我們的工作事半功倍。