復(fù)方紅景天對大強(qiáng)度訓(xùn)練大鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用

摘　要　目的：探討中醫(yī)藥提高運(yùn)動成績、減輕過度訓(xùn)練引致的機(jī)體免疫力下降的作用機(jī)制。方法：50只大鼠隨機(jī)分成3組，進(jìn)行相應(yīng)的跑臺訓(xùn)練和測試。結(jié)果：大強(qiáng)度訓(xùn)練大鼠脾細(xì)胞抗體形成能力下降、白細(xì)胞移動抑制指數(shù)升高，且其血漿ACTH和β-EP的含量低于非訓(xùn)練對照組動物。而進(jìn)行大強(qiáng)度訓(xùn)練的同時服用復(fù)方紅景天的中藥組動物的上述指標(biāo)均有改善趨勢。結(jié)論：復(fù)方紅景天能提高大強(qiáng)度運(yùn)動大鼠的運(yùn)動能力及改善其免疫功能的作用可能是通過影響神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)實現(xiàn)的。

　　The regulation of Rhodiola Crenulata Compound on immune function of rats trained by heavy exercise

SHI Jian-Rong,ZHUANG Jian-Qing,GUO Rui-Xin et al. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200032 

　　Abstract Objective:In order to study the effect of TCM on decreased immune function of the body after heavy exercise(HE) training.Methods:50 rats were divided into three groups in the experiment.Results:A decline in the ability of antibody forming of spleen cells and an increase of the inhibitor moving index of white cells were observed in the rats after heavy exercise training. Meanwhile the contents of ACTH and β-EP in the plasma of the HE rats were lower than that of the normal control.In the group of TCM+HE,the rats were received Rhodiola Crenulata Compound and forced heavy exercise,the above index were improved.This results indicated that this compound was effective in the exercise performance and could enhance immune function of the HE training rats.Conclusion:The effects of the neuroendocrine-immune regulatory circuit were believed to be the possible mechanism for explaining the effect of this compound on promoting the immune function on the rats with heavy exercise training.

　　Key words Heavy exercise training Immune function Neuroendocrine-immune Rhodiola Crenulata Compound

　　適度的運(yùn)動可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，而過度或激烈運(yùn)動則會降低機(jī)體免疫力。對運(yùn)動員來說，平時大強(qiáng)度的訓(xùn)練和賽期激烈的比賽又是不可避免的，故常發(fā)現(xiàn)一些運(yùn)動員在訓(xùn)練比賽后，機(jī)體抵抗力下降，容易感染疾病，以致影響他們的運(yùn)動能力，甚至停止參加比賽［1］。因此，如何減輕過度訓(xùn)練引致的機(jī)體免疫力下降、提高運(yùn)動成績成了研究熱點。中醫(yī)藥為研究解決上述問題提供了新的途徑。本課題觀察了大鼠大強(qiáng)度訓(xùn)練模型的免疫功能變化及中藥復(fù)方紅景天對該模型大鼠免疫功能的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。

　　1　材料與方法

　　1.1　復(fù)方紅景天煎劑的制備　將紅景天、黃芪、白術(shù)、麥冬等(由上海市藥材公司提供)中藥按比例配好，溫浸2 h后水煎，濃縮為1.78 g生藥/ml。

　　1.2　動物分組及給藥　將50只體重190 g左右(3月齡)純種SD雄性大鼠(由上海醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)進(jìn)行跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練，剔除不會跑、不愿跑的，篩選出37只大鼠，隨機(jī)分成3組：非訓(xùn)練對照(Normal control)組，7只動物，大強(qiáng)度訓(xùn)練(Heavy exercise,HE)組，15只動物，中藥(TCM+HE)組，15只動物。中藥組通過灌胃給藥，給藥量為10 ml/kg體重，每日分2次灌胃。非訓(xùn)練對照組與大強(qiáng)度訓(xùn)練組動物以水代藥，每天亦灌胃2次。根據(jù)量效關(guān)系的預(yù)測實驗，中藥的最佳用量相當(dāng)于臨床成人用量的25倍。

　　1.3　跑臺訓(xùn)練方法　非訓(xùn)練對照組動物自由生活在籠內(nèi)，不施加運(yùn)動負(fù)荷。大強(qiáng)度訓(xùn)練組及中藥組大鼠用國產(chǎn)電動鼠類跑臺進(jìn)行訓(xùn)練［2］，每周訓(xùn)練6 d。第1周以15 m/min的速度，每天訓(xùn)練10 min；第2周跑速為20 m/min，跑時從每日10 min起增至每日60 min；第3周前3日速度為30 m/min，時間為60 min，后3日跑速不變，跑時每日增加10 min，從70 min/d增至90 min/d；第4周至第8周，均以30 m/min的速度訓(xùn)練90 min。訓(xùn)練過程中，由于動物腳傷或不明原因的不愿跑，又淘汰9例，到第8周結(jié)束時，大強(qiáng)度訓(xùn)練組為10只大鼠，中藥組為11只大鼠。

　　1.4　跑步成績測試　第8周的第1天，大強(qiáng)度訓(xùn)練組和中藥組大鼠在固定速度為40 m/min的情況下跑步，以大鼠竭盡全力所能持續(xù)的最長跑時作為跑步成績。

　　1.5　取樣及測試方法　8 w結(jié)束后，大強(qiáng)度訓(xùn)練組和中藥組大鼠在最后一次訓(xùn)練停止后20 h左右，用戊巴比妥麻醉，在上午完成取血及有關(guān)組織材料的取樣。溶血空斑試驗(PFC)用小室液相法測定抗體形成細(xì)胞,白細(xì)胞移動抑制試驗用毛細(xì)管法測定移

　　動抑制指數(shù)(IMI),血漿ACTH及β-EP分別由上海市內(nèi)分泌研究所、第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室檢測。

　　2　結(jié)果

　　2.1　大強(qiáng)度訓(xùn)練組與中藥組(TCM+HE)跑步成績比較　見表1。

　　2.2　3組大鼠白細(xì)胞移動抑制指數(shù)、溶血空斑試驗及血漿ACTH、β-EP的含量　見表2。

表1　大強(qiáng)度訓(xùn)練組與中藥組跑步成績比較(min)

　　Tab.1 The comparison of running time between the HE group and the TCM+HE group(min)

　　note:t test，P＜0.05，the mean:HE 189.03±95.20，TCM+HE 254.48±103.25 

表2　3組大鼠白細(xì)胞移動抑制指數(shù)、溶血空斑試驗及血漿ACTH、β-EP的含量(±s)

　　Tab.2 The results of IMI，PFC and the plasma contents of ACTH and β-EP in the three group animals (±s)

　　note:F test，1)compared with the normal control group P＜0.05，2)compared with the normal control group P＞0.05

　　3　討論

　　機(jī)體免疫細(xì)胞存在不同遞質(zhì)和激素受體，接受神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)；另外，免疫細(xì)胞也分泌不同遞質(zhì)、激素和細(xì)胞因子對神經(jīng)、內(nèi)分泌以及免疫系統(tǒng)本身實現(xiàn)反饋性調(diào)節(jié)，形成神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)。在生理活動情況下維持機(jī)體正常免疫功能。其作用是極其復(fù)雜的，如生長激素對免疫功能具有廣泛的加強(qiáng)作用，而腎上腺糖皮質(zhì)激素具有廣泛的抑制作用，ACTH及β-EP則表現(xiàn)為對免疫的雙重調(diào)節(jié)作用［3］。

　　運(yùn)動對免疫功能的影響與運(yùn)動強(qiáng)度、訓(xùn)練時間有關(guān)：長期適度或輕度及中度慢性運(yùn)動對免疫系統(tǒng)的影響，可能是機(jī)體對運(yùn)動應(yīng)激的生理性反應(yīng)。而急性激烈運(yùn)動和長期激烈的訓(xùn)練促進(jìn)體內(nèi)具有免疫抑制作用的激素的釋放，抑制了機(jī)體免疫功能。小鼠經(jīng)過5 w較大強(qiáng)度游泳訓(xùn)練后，CD4+/CD8+細(xì)胞比值降低，T抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生增加，脾細(xì)胞對外源性IL-2的反應(yīng)能力降低，對TD抗原的二次抗體應(yīng)答受抑制，抗體產(chǎn)生水平較對照組明顯降低，這些結(jié)果表明大強(qiáng)度訓(xùn)練可引起免疫抑制［4］。

　　本實驗用大鼠跑臺運(yùn)動模擬田徑運(yùn)動中周期性耐力項目的反復(fù)超長距離跑步，造成大鼠大強(qiáng)度運(yùn)動模型［2，5］。觀察到大強(qiáng)度訓(xùn)練組動物第8周時體重(345.90±23.75 g)明顯低于非訓(xùn)練對照組(392.29±54.68 g，P＜0.05)，跑步持續(xù)時間的測試成績低于中藥組，PFC和IMI實驗結(jié)果均表明該組動物的體液免疫和細(xì)胞免疫水平下降，血漿中ACTH和β-EP含量均低于非訓(xùn)練對照組。一般情況下，大運(yùn)動量后即刻測定機(jī)體血漿ACTH是升高的，本工作中所測得的ACTH的下降可能與大強(qiáng)度訓(xùn)練及取樣時間有關(guān)(實驗動物在末次運(yùn)動20 h后取樣)。

　　目前認(rèn)為ACTH和β-EP是一種免疫系統(tǒng)內(nèi)源性調(diào)節(jié)的重要調(diào)質(zhì)，二者的變化常相伴出現(xiàn)、明顯相關(guān)。不少作者認(rèn)為大強(qiáng)度運(yùn)動引起β-EP增加［6］，也有報道運(yùn)動后β-EP下降［7，8］，Vires認(rèn)為這些不同結(jié)果與訓(xùn)練強(qiáng)度的不一致、實驗取樣前一天的運(yùn)動量以及機(jī)體的休息情況有關(guān)。此外，不同實驗者在體外的關(guān)于ACTH和β-EP的免疫功能調(diào)節(jié)作用觀察結(jié)果有時呈相反或雙重作用，其機(jī)理尚不完全清楚［9］。

　　中醫(yī)的重要理論如正邪學(xué)說、陰陽學(xué)說和臟象學(xué)說中的某些論述與免疫學(xué)的一些基本概念有類同之處。多年的臨床實踐證明，補(bǔ)腎法能改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，健脾補(bǔ)氣、補(bǔ)肺益氣方藥等都具有提高機(jī)體免疫功能的作用。中藥所引起的免疫功能變化，不僅是作用于免疫系統(tǒng)的結(jié)果，還可能是通過神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)所表現(xiàn)出來的總效應(yīng)［10］。

　　根據(jù)文獻(xiàn)報道和我們的調(diào)研結(jié)果：長期大強(qiáng)度訓(xùn)練的運(yùn)動員以氣陰兩虛為主。故本實驗中用抗疲勞、耐缺氧的具有適應(yīng)原樣作用的紅景天為主藥，并且輔以補(bǔ)氣升陽健脾益氣的黃芪、白術(shù)以及養(yǎng)陰生津的麥冬等，以改善大強(qiáng)度訓(xùn)練大鼠機(jī)體的功能，提高運(yùn)動能力。其中的黃芪，它不僅能增強(qiáng)免疫功能，還有雙向調(diào)節(jié)作用，可以認(rèn)為是一種免疫調(diào)節(jié)劑。黃芪具有增強(qiáng)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、提高機(jī)體抗病能力的作用是較肯定的事實。我們曾比較復(fù)方紅景天與單方的作用，實驗結(jié)果顯示復(fù)方提高小鼠運(yùn)動能力的作用超過單方，說明復(fù)方加強(qiáng)益氣養(yǎng)陰的作用，能更好調(diào)節(jié)長期大強(qiáng)度訓(xùn)練的機(jī)體功能，在大鼠進(jìn)行大強(qiáng)度訓(xùn)練的同時服用中藥后運(yùn)動成績提高；細(xì)胞和體液免疫功能以及血漿ACTH和β-EP水平與正常對照動物無顯著性差異，說明有接近正常組動物的趨勢，推測可能與該中藥調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂的作用有關(guān)。作者簡介：施建蓉，女，35歲，碩士，副研究員，主要從事中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究；

　　莊劍青，女，47歲，碩士，副研究員，主要從事中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)研究

　　4　參考文獻(xiàn)

　　[1]　馮建英.運(yùn)動與免疫.中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志，1992；11(4)：226

　　[2]　葉劍飛，余　閩，芩浩望.過度訓(xùn)練的病理生理及康復(fù)——I大鼠過度訓(xùn)練模型的建立.中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志，1992；11(1)：15

　　[3]　范少光，丁桂鳳.神經(jīng)內(nèi)分泌與免疫系統(tǒng)之間相互作用的介導(dǎo)物質(zhì)，共同的生物學(xué)語言.生理科學(xué)進(jìn)展，1995；26(2)：175

　　[4]　浦鈞宗，唐　培，馮建英 et al.不同訓(xùn)練量對動物免疫指標(biāo)影響的研究.中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志，1996；15(3)：170

　　[5]　Bedford T G,Tipton C M,Wilson N C et al.Maximum oxygen consumption of rats and its changes with various experimental procedures.Journal of Applied Physiology,1979;47:1278

　　[6] 徐曉陽.內(nèi)啡肽——運(yùn)動時的變化及其意義.中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志，1995；14(2)：108

　　[7] Vires W.de,Platen P,Vervoom C et al.Basal plasma betaendorphin (END) as a function of actue exercise and training.Medicine and Science in Sports and Exercise,1991;23(4):s108

　　[8] Keized H A,Platen P,Koppeschaar H et al. Decreased β-endorphin responses to exercise after exhaustive training.Medicine and Science in Sports and Exercise,1991;23(4):s108

　　[9]　曲瑞瑤.阿黑皮質(zhì)原衍生肽與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié).免疫學(xué)雜志，1993；9(2)：137

　　[10]　宮 斌，莫啟忠，莫志洪et al.補(bǔ)腎中藥對免疫大鼠腦和脾臟組織中神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響.中國免疫學(xué)雜志，1994；10(2)：101