利普斯50(E50)牛奶抗生素檢測試劑操作規(guī)范

一．操作步驟

 1.   用美工刀切割試劑單孔，先縱向割開一條(8個)，再橫向割一個或兩個、三個……(沿兩孔之間縫隙割)。

 2.   取出割好的檢測單孔，做好相應(yīng)樣品標(biāo)記(可以在側(cè)面用細水筆標(biāo)記數(shù)字)，揭開密封鋁箔。

 3.   使用取樣槍按樣品順序吸取各樣品(50μl)，加到相應(yīng)單孔中。注意：每個取樣頭對應(yīng)一個樣品，用過的取樣頭扔掉。

   4．全部樣品添加完畢后，剪取相應(yīng)密封條對檢測單孔進行密封。(密封條已經(jīng)對應(yīng)單條截好，只需用手撕取，檢測量不到一條8個的，再對應(yīng)用剪刀剪取)。

   5．將密封后的檢測單孔放入水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)器內(nèi)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間2小時30分鐘左右。

 6．取出培養(yǎng)后的檢測，從側(cè)面觀測單孔顏色，記錄檢測結(jié)果。

            注：結(jié)果判讀

                黃色到淺黃綠色包括綠色為陰性結(jié)果范圍  

                藍綠色到紫色為陽性結(jié)果范圍   

   7.為了保證每次檢測的準(zhǔn)確性以及找到錯誤結(jié)果的原因，每次檢測建議做一個陰性對照(用無抗奶作為陰性對照)，如果有條件同時也可以做一個陽性對照(10ppb的青霉素樣品作為陽性對照，為了確保試劑是否正常)。

二．試劑保存

   1．保存溫度： 4-12℃ (一般冰箱的保鮮柜即可滿足保存條件)

   2．避光保存：本產(chǎn)品對陽光敏感，一般不要長時間暴露在陽光下，或者燈光下。

      注：試劑不可冷凍保存，經(jīng)過冷凍的試劑內(nèi)部成分將被破壞；試劑及樣品要恢復(fù)到室溫后才可開始檢測操作，但是需要把剩余的檢測小孔馬上放回冰箱，以免重復(fù)多次后影響試劑的性能。

三． 注意點

  1．培養(yǎng)的工具，可以使用恒溫水浴鍋，或者生化培養(yǎng)箱，溫度必須嚴格控制在65℃±1℃，超過此溫度條件，檢測結(jié)果會受到影響，嚴重的就會有假陽性和假陰性結(jié)果出現(xiàn)。

2.每板未使用完的試劑一定要馬上要放回盒子里面，并在冰箱保存，注意要用原來的塑料袋繼續(xù)封好。另外不要把已經(jīng)撕開的小孔或者不小心弄破鋁薄紙的小孔繼續(xù)放回冰箱待用，如果不小心弄破小孔后要用粘膠紙封好，并且在最快時間內(nèi)使用完。

3.在使用恒溫水浴鍋時，把加好樣品后的檢測小孔用配備的粘膠紙密封完全，以避免因為受熱而進水。另外，把試劑孔放在框板里面，然后慢慢地放入水浴鍋內(nèi)，使之漂浮在水面上。不要把框板整個放入水面以下，這樣會使膠紙粘性失效或者降低，使水氣或者水進入小孔內(nèi)，使檢測結(jié)果發(fā)生偏差。

4.加樣槍的使用，加樣槍有兩個檔位，以第一個為準(zhǔn)，輕輕往下按直到需要用較大力往下按為止，這個為一檔。要求一擋吸取牛奶樣品，二檔添加牛奶樣品，這樣保證加樣量達到50ul。50ul的容量大概是牛奶樣品占用了大概2mm左右的高度，或者大概是2滴半加樣槍的量，如果超過這個高度，很可能是加樣槍使用錯誤或者加樣槍已經(jīng)不準(zhǔn)確。

5.定期要對水浴鍋的溫度進行測量(最好連續(xù)觀察30分鐘，確定溫度是否還能在正常工作范圍內(nèi))，以保證實驗的準(zhǔn)確性。如果用恒溫培養(yǎng)箱做也需要做溫度的確認，不能超過規(guī)定范圍。專用的FX加熱器不需要做溫度確認。

6.剛擠下來的牛奶不能直接檢測，需要把牛奶先放在冰箱冷藏室1-2個小時后再開始檢測，剛擠下的熱牛奶含有很多的抑制微生物的成分，影響檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性。

7．樣品的PH值要求是和原料奶的PH值一樣，即6.6左右。如果PH值過高或過低都可能引起錯誤的結(jié)果，PH值過高則導(dǎo)致假陽性結(jié)果，PH值過低則導(dǎo)致假陰性結(jié)果。所以在每次檢測之前先測一下樣品的PH值。

8.如果加樣后，牛奶樣滲透到小孔底部(底部厚厚的一層白色)或者這個小孔側(cè)面都有白色的奶樣，證明試劑曾經(jīng)經(jīng)歷過非常低溫度狀態(tài)(2℃以下的溫度)，對于這種檢測小孔建議再做一次檢測來確認結(jié)果。

ECLIPSE50簡稱E50，是由西班牙引入中國的，并作為國標(biāo)第二法被納入乳品的法規(guī)。根據(jù)以前法規(guī)很難或者很長時間才改變的事實，從而可以認定它必將是個長期執(zhí)行的法規(guī)。E50使用的是微生物抑制法，試劑中的桿菌是在65.0℃生長最快的，其他溫度都會降低桿菌的生長速度，如果實驗者使用了溫度不能恒定的水浴鍋和培養(yǎng)箱，從而導(dǎo)致客戶在最佳培養(yǎng)時間時不能判讀結(jié)果。