腫瘤細胞原代培養(yǎng)可以:(1)研究癌變機理;(2)研究抗癌藥檢測;(3)研究癌分子生物學;(4)用于闡明和解決癌癥。
詳細實驗方法原理 | 腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養(yǎng)基,10%血清濃度即可,在原代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物,或原患者血清(1%-2%)以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。 |
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實驗材料 |
瘤組織 |
試劑、試劑盒 |
Hanks液 |
儀器、耗材 |
平皿 培養(yǎng)瓶 恒溫箱 |
實驗步驟 |
一、將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分。
二、在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎組織,切成1-2 mm3 小塊。 三、接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,37℃、5%CO2 或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。 |
其他 |
一、對腫瘤細胞系或細胞株的評價
已建成的各種腫瘤細胞系或細胞株,無疑都是可用的實驗對象。近年我國已建成的腫瘤細胞系已非常多,并獲得越來越廣泛的應用。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗,在使用這些細胞系時,應持特別審慎態(tài)度,主要是應考慮到這些細胞在長期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能。眾所周知,長期傳代細胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的。另外也可能發(fā)生如基因突變、基因易位或缺失等變化。其結果可能導致細胞產(chǎn)生生物學性狀上的變動。
以近年建成的各種腫瘤細胞系為例,都已傳代少則幾十,多則百代以上后,才確認建成了細胞系。這種情況下很難保證細胞從初代到建成時的性狀仍是一致的。已如前述,癌細胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去,凡已長期傳代的細胞系,都已獲得不死性。當前尚未完全確證所有癌細胞都具有不死性;因此尚難肯定在長期培養(yǎng)中的癌細胞的生物學性狀與體內(nèi)時仍完全相同(包括不死性)。據(jù)上述對用癌細胞系所獲實驗結果應盡量做分析性的結論,避免做概括性的與體內(nèi)等同的結論,外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說,應用各種較長時間培養(yǎng)細胞做實驗時,都應如此。
二、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率措施 根據(jù)人們的經(jīng)驗,腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。當腫瘤組織或細胞初代接種培養(yǎng)后,常出現(xiàn)以下幾種情況:
1. 完全無細胞游出或移動;
2. 有細胞移動和游出,但無細胞增殖,細胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代;
3. 有細胞增殖,傳若干代后停止生長或衰退死亡;
4. 傳數(shù)代后細胞增殖緩慢,經(jīng)過一段停滯期后,才又呈旺盛生長狀態(tài),形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細胞系。
以上現(xiàn)象說明腫瘤細胞對體外生存條件有較高的要求,并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應才能生長,因此欲獲得好的培養(yǎng)效果,不能局限于一般培養(yǎng)法,必須采用一些特殊的措施。
1. 適宜底物
把經(jīng)過純化的細胞接種在不同的底物上,如鼠尾膠原底層、飼細胞層等。
2. 生長因子
應用促細胞生長因子,向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細胞生長因子。根據(jù)細胞種類不同選用不同的促生長物,常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長因子。
為提高腫瘤細胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應力和增加有活力癌細胞(干細胞)的數(shù)量,可采用動物體轉嫁接種成瘤后,再從動物體內(nèi)取出進行培養(yǎng),能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動物以裸鼠最好。
3、動物體媒介培養(yǎng)方法
(1)瘤塊接種:取新鮮瘤組織,用 Hanks液洗凈血污,切成 1~3毫米小塊,用穿刺針頭吸一小瘤塊,用酒精棉球擦拭動物腹部后,直接刺入皮下,注入瘤塊。
(2)飼養(yǎng)觀察,待腫瘤生長達較大體積后,剝?nèi)〕隽鼋M織。
(3)進行體外培養(yǎng)。
(4)為防止失敗,仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種,有活力的腫瘤細胞數(shù)量增多,細胞培養(yǎng)易于成功。
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