細(xì)胞核提取試劑盒說明書

細(xì)胞核提取試劑盒說明書
貨號(hào)：SN0020
規(guī)格：50T/100T
保存：短期使用可4℃儲(chǔ)存，長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃或-70℃。產(chǎn)品內(nèi)容：
組份                SN0020 -50        SN0020-100
Lysis Buffer      100 mL             200 mL
Reagent A        2.5mL               5mL
Medium Buffer   25 mL              50 mL
Store Buffer      5 mL                10 mL
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。
細(xì)胞核提取試劑盒操作步驟： 1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50ulLReagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。 b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50ul Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，4℃，700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。
細(xì)胞核提取試劑盒注意事項(xiàng)：

1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。

3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。轉(zhuǎn)速與離心力換算: G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]2 G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示； [rpm]2即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。
相關(guān)產(chǎn)品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1015 4×蛋白上樣緩沖液（含DTT）
SM0020 線粒體提取試劑盒