TriQuick總RNA提取試劑（TriQuick Reagent）操作說(shuō)明

TriQuick總RNA提取試劑（TriQuick Reagent）
貨號(hào)： R1100
規(guī)格： 100ml
保存： 4℃避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑是一種通用的總RNA提取試劑，適用于動(dòng)植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA的抽提，可有效防止RNA在提取過(guò)程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase保護(hù)實(shí)驗(yàn)，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提�。�10平方厘米細(xì)胞或100mg組織）。

操作說(shuō)明:

自備新開(kāi)封或?qū)Ｓ寐确�，異丙醇�?5%乙醇，DEPC處理水。
1. 細(xì)胞裂解或組織勻漿： 1)貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）細(xì)胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆蓋培養(yǎng)細(xì)胞，再用吸管或加樣器吹打2~3次，細(xì)胞應(yīng)完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。2)懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，每五百萬(wàn)至一千萬(wàn)（5×106-1×107）動(dòng)植物或酵母細(xì)胞，或一千萬(wàn) (1×107)細(xì)菌，加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加樣器吹打，使其完全裂解。某些酵母和細(xì)菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，以確保其完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。3)組織：先將組織剪切成小塊，放入玻璃勻漿器內(nèi)。冷凍組織可在研缽中研磨勻漿。每50-100mg組織加入1ml TriQuick Reagent ，勻漿至完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。 裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。室溫放置5分鐘。對(duì)于多糖、蛋白等雜質(zhì)豐富的組織樣品，勻漿后仍會(huì)存留有不溶物質(zhì)，可12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取上清至一新的離心管中。

2. 分離：在裝有裂解物的離心管中加入0.2倍體積的氯仿（1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿），振蕩器上充分振蕩混勻30秒，室溫放置2-3分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，每毫升TriQuick Reagent 約可吸取0.5-0.6 ml。有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，應(yīng)避免觸及。

3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫沉淀10分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，在管底可見(jiàn)RNA沉淀。棄上清，按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇，輕輕顛倒混勻，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃離心2分鐘，棄去液體，小心勿丟棄RNA沉淀。室溫倒置晾干5~10分鐘。4. 溶解：加入適量DEPC處理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。

注意事項(xiàng)：
1，RNA提取過(guò)程中所用器皿、離心管、吸頭等應(yīng)保證無(wú)污染無(wú)RNA酶。操作中應(yīng)小心，防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解。2，試劑中含有酚等有害物質(zhì)，注意個(gè)人防護(hù)。
相關(guān)產(chǎn)品：
R1600 DEPC處理水
P1011 酚：氯仿：異戊醇＝25：24：1（PH<5.0）
R1050 5×RNA Loading Buffer
M1010 10×MOPS 緩沖液
SR0020 RNAwait(非凍型組織RNA保存液)