免疫組化染色結(jié)果容易受哪些因素影響

     眾所周知免疫組化技術(shù)對于研究腫瘤的發(fā)展規(guī)律，進(jìn)行良惡性分類及鑒別診斷具有重要的作用，因此在做此類實(shí)驗(yàn)過程中一定要加倍謹(jǐn)慎起來，尤其是免疫組化染色實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果很容易受某些因素影響。那么，免疫組化染色結(jié)果容易受哪些因素影響？

    專家指出：免疫組化染色的結(jié)果，與組織的固定、抗原的修復(fù)、抗體的保存及使用三個(gè)重要因素相關(guān)密切。

    1、固定

    常用的組織固定液是甲醛，標(biāo)本必須及時(shí)固定，這有利于抗原的保存，防止抗原在組織細(xì)胞內(nèi)彌散、丟失或失去免疫活性，但固定時(shí)間最好為！“ 小時(shí)，一般不超過”# 小時(shí)，因固定時(shí)間越長，部分組織細(xì)胞免疫組化標(biāo)記敏感性會(huì)明顯降低。其原因?yàn)榧兹┕潭ㄟ^程中會(huì)形成醛鍵或羧甲基，而封閉了部分抗原決定簇；也會(huì)使蛋白與蛋 白之間發(fā)生交聯(lián)，也可能會(huì)封閉抗原決定簇，使許多抗原如常用的$%、&$‘（ 等免疫反應(yīng)明顯減弱，甚至消失，致酶標(biāo)不能得出正確的結(jié)果，因此在染色時(shí)為取得良好的染色效果，必須對有些抗原進(jìn)行預(yù)先修復(fù)，以進(jìn)一步暴露抗原。

    2、修復(fù)抗原

    外檢組織經(jīng)過甲醛固定、脫水透明及浸蠟過程，組織中的抗原成分已被破壞或封閉，為了恢復(fù)組織的抗原性和提高組織對抗體的敏感性，一般需 修復(fù)抗原。有人用蛋白酶消化，或微波處理，或高壓鍋處理，使封閉的抗原成分暴露出來而顯色。我們采用高溫高壓處理切片，切片在弱酸及高溫高壓下，使封閉的抗原顯示出來，提高了陽性檢出率和陽性強(qiáng)度，同時(shí)減輕了背景著色，使陽性結(jié)果清晰可辨。當(dāng)然，不同組織、不同抗原其所用的高壓時(shí)間及選用合適的抗原 修復(fù)緩沖液及其最適的。' 等均對結(jié)果影響甚大。

    3、正確保存及使用抗體

    抗體是免疫組織化學(xué)最基本的試劑與材料，它可分為第一抗體與第二抗體，因?yàn)榭贵w是蛋白質(zhì)構(gòu)成，保存或使用不當(dāng)，不但會(huì)造成浪 費(fèi)，而試劑變質(zhì)會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。對抗體及6、7試劑盒均應(yīng)放置低溫冰箱貯存，用一支取一支，對于一次用不完的抗體可保存在# 8冰箱內(nèi)，而不要放在冰格室，因?yàn)槟抢锏臏囟仍? 8以下，抗體會(huì)很快結(jié)冰，再次使用時(shí)又要溶解。這樣幾次凍融，抗體效價(jià)會(huì)急劇下降而失效。對一些將近失效期或已過失效期，有的適當(dāng)提高工作濃度， 也可以作出正確的結(jié)果，以免丟失造成浪費(fèi)。

    當(dāng)然影響免疫組化染色的結(jié)果 ,除了以上這些，還有一些其他的因素，如載玻片需用防脫片，容器清潔處理， 以減少污染�？乖�， 抗體作用的時(shí)間也需調(diào)整，我們延長一抗作用時(shí)間，發(fā)現(xiàn)效果更好。冬天放置）9 8恒溫箱孵育，縮短作用時(shí)間，以及顯色時(shí)間的長短，切片厚薄都有關(guān)系。