DNA合成儀合成原理介紹

DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基質(zhì)上，然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應(yīng)用DNA聚合酶的DNA合成。

合成過程:

第一個(gè)堿基的3‘末端固定在樹脂上，下一個(gè)堿基的5’-OH用二對(duì)甲氧三苯甲基DMT保護(hù)，堿基上的氨基用苯甲酸保護(hù)，然后對(duì)3‘-OH用氨基磷酸化合物進(jìn)行活化。
1.1個(gè)堿基的5’-OH和下個(gè)堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，

2.然后用碘氧化成磷酸三酯

3.加入二氯乙酸除去第二個(gè)堿基5’-OH上的保護(hù)劑DMT

循環(huán)進(jìn)行加入下一個(gè)堿基合成完畢后

1.用苯硫酚除去5’-OH上的保護(hù)劑DMT

2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開，洗脫
3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護(hù)劑

4.除去氫氧化銨，真空抽干

5.液相色譜或者PAGE，回收片段最長(zhǎng)的。