轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品核酸水平檢測(cè)流程

轉(zhuǎn)基因食品問(wèn)題，一直以來(lái)都是充滿(mǎn)爭(zhēng)議的話(huà)題；如何科學(xué)正確地檢測(cè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品，成了政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)及相關(guān)工作者高度關(guān)心的問(wèn)題。

轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的檢測(cè)，就是檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中是否含有外源基因，即檢測(cè)啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因、外源基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的豐度等。就方法而言，又分為基因水平的檢測(cè)和蛋白水平的檢測(cè)。

稱(chēng)取一定質(zhì)量的樣品，在研缽中研磨或用自動(dòng)組織勻漿儀處理，得到樣品粉末，同時(shí)使組織細(xì)胞破壁、釋放出核酸。

可以采用商業(yè)化DNA提取試劑盒，手動(dòng)或利用自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)制備DNA模板，用于后續(xù)的PCR分析。

對(duì)物種內(nèi)源基因的PCR檢測(cè)，主要用于驗(yàn)證DNA模板的提取質(zhì)量；

可采用普通PCR方法將目標(biāo)內(nèi)源基因擴(kuò)增后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離，利用凝膠成像設(shè)備觀察分析是否有出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶；

也可通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法直接檢測(cè)目標(biāo)內(nèi)源基因的有無(wú)。

檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性表明從樣品中提取出適宜進(jìn)行檢測(cè)的DNA，可以進(jìn)行外源基因檢測(cè)，否則應(yīng)重新進(jìn)行DNA提取和純化。

對(duì)植物中轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)，先篩選檢測(cè)CaMV 35S、NOS、NPTII、PAT、BAR基因（啟動(dòng)子、終止子等等），確定是否含有外源基因；篩選結(jié)果陰性則直接報(bào)告結(jié)果；

若篩選結(jié)果陽(yáng)性，則需要進(jìn)一步鑒定檢測(cè)MON810、Bt11、Bt176、T14/T25、CBH351、GA21、TC1507、MON863、NK603、Bt10（結(jié)構(gòu)基因）的結(jié)構(gòu)特異性基因或品系特異性基因以確定是何種轉(zhuǎn)基因品系。

這兩個(gè)步驟均可通過(guò)普通PCR或者實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法完成。

如果采用普通PCR方法檢測(cè)篩選基因與結(jié)構(gòu)特異性基因或品系特異性基因結(jié)果為陽(yáng)性，則需要通過(guò)采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法進(jìn)行結(jié)果確證實(shí)驗(yàn)。

定性結(jié)果表述：

對(duì)于X物種，未檢出轉(zhuǎn)基因成分；

對(duì)于X物種，檢出轉(zhuǎn)基因成分，（可進(jìn)一步報(bào)告）該樣品中含有XX轉(zhuǎn)基因品系。

定量結(jié)果表述：

未檢出轉(zhuǎn)基因成分，定量方法檢測(cè)限為X%;

樣品中XX轉(zhuǎn)基因成分低于本定量方法檢測(cè)限（X%）;

樣品中所含XX轉(zhuǎn)基因成分為X%。