細菌內(nèi)毒素工作標準品振蕩15分鐘的理論依據(jù)介紹
瀏覽次數(shù):2668 發(fā)布日期:2015-4-24
來源:上海北諾生物科技有限公司
細菌內(nèi)毒素(Endotoxin),是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有結構,它在細菌生長、繁殖過程中,并不分泌到介質(zhì)中,也不能從外壁層上自然脫落,它不是細菌的代謝產(chǎn)物,當細菌死亡解體后,才顯示出一系列的內(nèi)毒素生物活性。
細菌內(nèi)毒素的化學結構是脂多糖和微量蛋白的復合物,脂多糖由三部分組成:O-特異性鏈、核心多糖和類脂A三部分組成。
O-特異性鏈:向外由若干個低聚糖的重復單位組成的多糖鏈,具有特異性。
核心多糖:分為內(nèi)核心及外核心,外核心由數(shù)種單糖,包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等組成。內(nèi)核心含有庚糖及特殊的KDO(3-脫氧-D-甘露糖-辛酮糖)。KDO以耐酸的酮糖鍵與類脂A的氨基葡萄糖連接。所有G-菌都有此結構。
類脂A:位于最外層,是以脂化的葡萄糖胺二糖為單位,通過焦磷酸鍵組成的一種獨特的糖脂化合物,具有致熱作用,是革蘭氏陰性細菌內(nèi)毒素的毒性成分。游離的類脂A可自身凝集成高分子的復合物,其分子量大小不等。游離的類脂A含有疏水性的中心及親水性的邊緣,是一種雙相分子。
內(nèi)毒素標準品是從大腸桿菌E.ColiO111B4菌株的細胞壁提取精制而成。細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解后,內(nèi)毒素的疏水性中心相互結合形成大分子復合體,而難溶于水!都毦鷥(nèi)毒素檢查法》要求“將細菌內(nèi)毒素國家標準品或細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解后在旋渦混合器上混勻15分鐘,每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30秒鐘! 在旋渦混合器上混勻15分鐘的目的是借助外力破壞這種分子復合體,使內(nèi)毒素均勻的分布在水溶液中,保證試驗結果的真實準確。如果沒有旋渦混合器或混勻時間不夠,均會導致細菌內(nèi)毒素分子復合體,這種溶質(zhì)不能分散在溶媒中,而影響試驗結果的準確性。