最近,科學家在JBC(Journal of Biological Chemistry 291, 5270-5277) 發(fā)表了一篇很有價值的文獻, 發(fā)現(xiàn)Naa10這個蛋白并不具備蛋白質(zhì)賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的性質(zhì)。 文獻采用了2家不同抗體公司的抗乙酰賴氨酸抗體, 一家來自CST (圖 A,Cell Signaling Technology的抗體,catalog no.9681);另一家來自藍光生物的母公司ImmuneChem(圖B, ImmuneChem的抗體, catalog no. ICP0380)。不同的抗體來源結(jié)果各異, 究竟哪一家的更好? 先來了解和比較一下文獻的實驗結(jié)果。
兩家來源的抗體各顯示了各異的結(jié)果.
1)從圖B (抗體來源ImmuneChem, ICP0380)的結(jié)果看可以做這樣的結(jié)論:Naa10 不能乙;Runx2和MSRA; Runx2及MSRA可以被Acetyl-CoA非酶促反應(yīng)乙;。 這和文章的結(jié)論一致。
2)若從圖A (抗體來源Cell Signalling)的結(jié)果(圖紅圈)來看,只能說H3, Runx和MSRA三個底物都不適合做本次實驗。 因為抗體對空白組實驗(底物沒有酶和Acety-CoA)都能識別, 從特別從H3乙;慕Y(jié)果看,很難體現(xiàn)是否有酶促乙;磻(yīng)。
3)但從圖B (抗體來源ImmuneChem, ICP0380)的結(jié)果(藍方框)看,該抗體能特異性的識別了乙;H3, 可以得出結(jié)論只有hMOF酶和Acety-CoA同時存在催化下, H3發(fā)生了乙酰化。
可以說一個抗體的特異性決定其檢測結(jié)果的可靠性。 若一個抗體不特異,不能分辨蛋白質(zhì)是否被乙酰化,結(jié)果則不可靠, 結(jié)論就不正確,誤導了科學結(jié)論,在刊登科技文獻時就會被評審質(zhì)疑,浪費人力財力資源。 這是很悲催的事情!
選擇一個正確的抗體做你的研究,事關(guān)重要,非同小可!!!
如何評價一個抗體是否泛乙酰化抗體? 提供以下倆點參考:
1)在產(chǎn)品說明書上要發(fā)現(xiàn)這個抗體是用乙酰賴氨酸特異的免疫親和層析分離純化得到的, 是特異性抗體的可能性大。
2)在產(chǎn)品介紹或科學文獻證明:這個抗體的抗乙;鞍/多肽免疫信號(WB或ELISA)可以被已知乙;鞍兹缫阴;疊SA(acetylated BSA ,ICP6090)所抑制。
3)同時具備以上2點特性的抗乙;嚢彼峥贵w,幾乎可以肯定是乙酰化賴氨酸特異性抗體。
ImmuneChem的乙;贵w, 產(chǎn)品資料是這樣的:
1) 該抗乙;嚢彼峥贵w(ICP0380) 是采用乙酰賴氨酸填料進行免疫親和層析分離純化得到的高純度抗體!
2)該抗體所制備的抗體填料(ICP0388)已經(jīng)成為國際上乙;鞍踪|(zhì)組學研究廣泛應(yīng)用的乙;鞍/多肽的免疫親和純化富集材料。
3)科學證明我們抗體的乙酰化蛋白結(jié)合信號可以被乙;BSA競爭性抑制, 文獻發(fā)表于 Molecular Cell Vol 23, Issue 4, p607–618 :
圖:用IMMUNECHEM的抗體檢測細胞飼-餓(左2道)處理的乙酰化蛋白信號可以被乙;疊SA抑制(右2道).