CETSA-Wes檢測細胞內藥物與靶蛋白結合效率

大多數(shù)藥物是通過結合一個或多個蛋白質來影響其功能，這就產生了藥物開發(fā)中的兩個常規(guī)瓶頸：識別正確的靶蛋白，設計藥物能夠有效的尋找到并結合該蛋白。但是現(xiàn)在還沒有方法能夠有效且直接的測量藥物分子到達并結合靶蛋白的方法。卡羅林斯卡研究中心科學家開發(fā)出一種稱之為細胞熱轉移（CETSA，Cellular Thermal Shift Assay）的方法（Monitoring drug target engagement in cells and tissues using the cellular thermal shift assay, D Martinez Molina, R Jafari, M Ignatushchenko, T Seki, E.A Larsson, C Dan, L Sreekumar, Y Cao, P Nordlund, Science, 2013; 341:84-7.，）該方法采用的原理是靶蛋白在結合藥物分子后通常變得結構穩(wěn)定。

世界著名的腫瘤研究中心，安大略腫瘤研究所的科學家 Matias Casás-Selves，使用Wes 定量蛋白質表達分析系統(tǒng)建立了細胞熱轉移實驗平臺�，F(xiàn)分享其一研究數(shù)據(jù)：

Ø  細胞系： 粒細胞白血病細胞系MV4-11
Ø  藥物/化合物：該所專利化合物Compound1.無關化合物Compound2
Ø  研究靶蛋白：Protein X
Ø  實驗流程：
細胞系2.5X10^6MV4-11細胞，52℃（之前研究顯示52℃可以使Protein X變性沉淀）條件下，在0.00001-10um Compound1中孵育1小時，裂解細胞，提取蛋白，使用Wes定量檢測Protein X水平。
Ø  實驗結果預期：
如果Compound 1可以結合Protein X，則Protein X穩(wěn)定，在52℃下不會變性，可以檢測到其表達量，且表達量和Compound 1量呈劑量依賴關系。
Ø  CETSA-Wes監(jiān)測結果：

隨Compound劑量升高，Protein X可監(jiān)測到的表達量升高，呈劑量依賴關系，并可據(jù)此計算IC50。

作為對照Compound2不結合Protein X，無保護作用，故Protein X變性沉淀，表達水平與Compound2無劑量依賴關系。

CETSA-Wes是一種創(chuàng)新的技術，可以定量檢測細胞內藥物和其作用靶蛋白結合能力，將有助推動藥物研發(fā)及藥物作用機理研究。

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