最主流的細(xì)胞活力檢測(cè)方法—CTG(CELL TITER-GLO)發(fā)光法簡(jiǎn)介

細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域。細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過(guò)DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過(guò)程。細(xì)胞通過(guò)分裂的方式增殖，細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征 。單細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新個(gè)體，多細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，從而補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞。細(xì)胞增殖的同時(shí)，在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，活細(xì)胞在總細(xì)胞中所占的百分比叫做細(xì)胞活力。

檢測(cè)細(xì)胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測(cè)細(xì)胞代謝活性?xún)煞N，前者主要是DNA前體物質(zhì)（胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物）摻入法，比如BRDU、EDU法；后者主要為MTT、XTT、MTS、CCK-8、WST-1及WST-8法等，在后者中現(xiàn)在最主流的就是CTG(CELL TITER-GLO)發(fā)光法，此法可快速靈敏的檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)量，市場(chǎng)上常用的是Promega公司CellTiter-Glo化學(xué)發(fā)光細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒。

ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡(jiǎn)稱(chēng)三磷酸腺苷)參與生物體內(nèi)多種酶促反應(yīng)，是活細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)指標(biāo)，其含量直接反應(yīng)了細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞狀態(tài)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中向細(xì)胞培養(yǎng)基加入等體積CellTiter-Glo™試劑，測(cè)量發(fā)光值，在光信號(hào)和體系中，發(fā)光值與ATP量成正比，而ATP又和活細(xì)胞數(shù)正相關(guān)，因此可通過(guò)檢測(cè)ATP含量得細(xì)胞活力。同普通的MTT、CCK8法相比，CellTiter-Glo™發(fā)光活細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)試劑具有最高靈敏度和較長(zhǎng)的信號(hào)持續(xù)時(shí)間，此系統(tǒng)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用在生命科學(xué)研究領(lǐng)域中，如一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等，各實(shí)驗(yàn)室已普遍使用此技術(shù)。此法還有很多優(yōu)點(diǎn)，如細(xì)胞活性分析是高效的“加樣－混合－測(cè)量”系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)操作方便快捷，同時(shí)節(jié)約細(xì)胞用量。CellTiter-Glo™試劑和細(xì)胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容，如RPMI1640、MEM、DMEMand Ham's F12，也不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響，誤差小，準(zhǔn)確率高。同MTT、CCK8法具體對(duì)比可見(jiàn)下表：