ELISA結(jié)果計(jì)算分析步驟詳解
作為ELISA的最后一步，檢測結(jié)果的計(jì)算對整個實(shí)驗(yàn)十分重要。
以夾心法為例。
1. ELISA的樣本通常要設(shè)置1~2個復(fù)孔進(jìn)行檢測，分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)組樣本的吸光度的平均值。單個樣本的檢測值不應(yīng)超出平均值的20%。
2. 樣本的OD（吸光度）平均值要減去標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0時(shí)的OD平均值。
3. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
在對數(shù)坐標(biāo)圖上擬合四參數(shù)的邏輯函數(shù)曲線（X軸上為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，Y軸為對應(yīng)的OD值）。推薦使用origin軟件。
詳細(xì)步驟如下：
第一步: 輸入OD值和標(biāo)準(zhǔn)品濃度
第二步：選擇擬合曲線類型
選中輸入的數(shù)值框，按如下操作依次點(diǎn)擊選項(xiàng)。
第三步：勾選“find specific X/Y”
完成上述操作后，點(diǎn)擊Fit按鍵，擬合曲線和相關(guān)信息將自動生成（如第四步所示）
第四步：查看標(biāo)準(zhǔn)曲線信息（如參數(shù)值，R-Square等）
第五步：設(shè)置坐標(biāo)軸類型為對數(shù)。
雙擊第四步中的擬合曲線圖，對其進(jìn)行編輯。雙擊X軸、Y軸設(shè)置坐標(biāo)類型為“Log10”。
第六步：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度
選擇第四個工作表（Fit NLF Find X from Y1），在左列輸入樣本的OD值，對應(yīng)的濃度將在右列自動生成。
如果樣本的OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，請?jiān)趯?shí)驗(yàn)前適當(dāng)稀釋樣本以獲得精確結(jié)果。在分析數(shù)據(jù)時(shí)，樣本實(shí)際濃度應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的濃度乘以稀釋倍數(shù)
