如何提高ELISA的精確重現性

免疫檢測法的精確性表現為單次實驗孔間（批內）的重復性和多次實驗之間（批間）的重復性。CV值高則表明精確度低，通常由以下兩個原因造成：移液技術和洗滌技術。


移液技術
1. 移液時，槍頭應對準孔中央，避免接觸孔壁及底部。
2. 移液后輕輕晃動混勻試劑。
3. 如果您的樣品具有黏性，請預先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。
4. 移液不充分或移液體積不均，說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。
5. 加樣時，不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭，避免交叉污染。
6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸液和加樣的體積。


洗滌技術
1. 如果使用自動洗板機或多通道移液器，請確保進出口能正常運作。
2. 最后一次洗滌后，翻轉酶標板倒出多余的洗滌液，并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會降低精確度。不能讓孔內液體自然風干，需立即進行下一步操作。
3. 按照說明書，添加足量的洗滌液至孔內，并保證洗滌完全。
4. 由于洗滌液不是通用的，當試劑盒內的洗滌液用完時，請不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要，可聯(lián)系技術支持尋求幫助。
5. 不要減少洗滌時的浸泡時間或跳過浸泡的步驟。
6. 按照說明書上推薦的洗滌次數清洗，隨意改變洗滌的次數會影響實驗的精確性。


貯液瓶
        為避免污染，不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染（比如唾液、氧化劑等），請參考說明書操作。必要時候采取一些預防措施保護溶液。


封板覆膜
        使用過的封板覆膜可能含有上一步實驗殘留的試劑，如果重復使用會造成孔板污染，從而導致精確性低。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。