細(xì)胞常用固定劑和固定方法

     培養(yǎng)細(xì)胞常用固定劑有4％多聚甲醛磷酸緩沖液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃預(yù)熱的PBS輕洗細(xì)胞。

1．4％多聚甲醛磷酸緩沖液 固定10—20分鐘，干燥。

2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分鐘，自然干燥。

3．丙酮 4℃冷丙酮固定組織穿透性和脫水性強(qiáng)，抗原保存好，很少用于組織切片，常用于培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞涂片的固定，平時丙酮4℃低溫保存?zhèn)溆�，臨用時，將載玻片插入冷丙酮內(nèi)5～10分鐘，取出后自然于燥。

4．乙醇 95％乙醇脫水性強(qiáng)，易引起組織收縮、變硬，影響切片質(zhì)量，因而固定時間不宜過長（2小時內(nèi)）。乙醇使蛋白變性程度輕，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育時間長的情況下，抗原可流失，并減弱反應(yīng)強(qiáng)度。

5．乙醚（或三氯甲烷） 與乙醇等量混合對組織穿透性極強(qiáng)，即使涂片上含較多的黏液，固定效果仍較好，是理想的細(xì)胞固定液。

培養(yǎng)細(xì)胞固定之后晾干可使細(xì)胞牢固地黏附在載玻片上，故對于容易脫落的細(xì)胞應(yīng)延長晾干時間。晾干之后PBS漂洗3次，然后進(jìn)行組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)染色。