M65 ® ELISA試劑盒檢測CK-18在檢測病患肝細胞凋亡狀況中的應用
《非酒精性脂肪性肝病防治指南》2018已更新，持續(xù)增高的NAFLD 患者建議檢測CK-18
非酒精性脂肪性肝病簡介
《非酒精性脂肪性肝病診療指南》的修訂
角蛋白18簡介
《指南》中提到的CK-18是指角蛋白18（K18, cytokeratin 18 或CK-18）。CK-18是在多種上皮細胞中高表達的胞內蛋白。大多數(shù)CK-18蛋白在胞內是不可溶性的，并在細胞死亡期間隨著細胞的破裂被釋放到細胞外。CK-18在細胞凋亡期間被caspase催化發(fā)生水解，為caspase所切割的片段釋放到細胞外。因此細胞外的 caspase-cleaved CK-18 （ccK-18）濃度反映了細胞凋亡的數(shù)量。同時檢測CK-18和ccK-18，可知道總細胞死亡中細胞凋亡的比例。
細胞凋亡與NAFLD
細胞死亡，包括壞死和凋亡。其中細胞壞死是非正常原因造成的細胞死亡。
與壞死不同，細胞凋亡是由體內外因素觸發(fā)細胞內預存的死亡程序而導致的細胞主動性死亡方式，是保持肝細胞穩(wěn)定的一種新陳代謝過程。但是當細胞凋亡失衡時會對肝細胞造成潛在的損傷作用。
越來越多的研究認為在NAFLD進展過程中，隨著肝細胞變性、壞死增多，細胞凋亡的比例也在增加。Feldstein等對NASH患者肝活組織標本應用TUNEL方法檢測肝細胞凋亡，發(fā)現(xiàn)凋亡明顯增加，并且細胞凋亡隨肝纖維化和脂肪性肝炎炎癥病變程度增加而增加。在NASH中，肝細胞凋亡在由單純性脂肪肝轉變?yōu)橹拘愿窝�、肝纖維化過程中起重要作用。肝細胞凋亡不僅在脂肪肝發(fā)生肝炎反應的活動中發(fā)揮促進作用。而且也是肝纖維化過程中促發(fā)肝星狀細胞活化與增殖的關鍵環(huán)節(jié)。肝細胞的凋亡，促進了肝損傷，直接加重了炎癥反應和肝纖維化程度。
CK-18的ELISA檢測方法
PEVIVA品牌的M65 ® ELISA試劑盒（產(chǎn)品編號：10020）以夾心法定量CK-18，一塊預包被了CK-18鼠源單抗的96孔板，以HRP偶聯(lián)M65抗體作為一抗，可用以評估人血清或則血漿中上皮細胞死亡情況。M30 Apoptosense® ELISA 試劑盒（產(chǎn)品編號10011）則特異性檢測在凋亡時caspase-cleavaged CK-18在Asp396形成的新表位（又稱為K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope），以此反映上皮細胞的凋亡情況。兩種檢測試劑盒的單位根據(jù)同一標準校對，可以計算caspase-cleaved和總CK-18（“M30:M65比”）。M30:M65 比值代表了細胞死亡總數(shù)中細胞凋亡細胞所占的比例。細胞凋亡導致caspase-cleaved CK-18釋放，M30:M65比值較高；然而如果細胞只是發(fā)生壞死，只有CK-18的水平是升高的，所以M30:M65比值較低。
總結
目前雖然肝臟活檢被認為是評估患病情況的標準方法，但是這種侵入式的技術會給患者帶來創(chuàng)傷，且有一定風險，不適合疾病監(jiān)測及相關機制的研究�！吨改稀芳霸絹碓蕉嗟奈墨I支持以基于血液學的方法來對NAFLD進行研究和評估，這種方式既減少了病患痛苦，又降低了研究人員采樣的難度。PEVIVA細胞死亡系列試劑盒采用血液作為樣本，是檢測病患肝細胞凋亡狀況的非入侵式方法，是實驗研究的理想選擇。
非酒精性脂肪性肝病簡介
非酒精性脂肪性肝�。∟onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是一種與胰島素抵抗（Insulin resistance, IR）和遺傳易感密切相關的代謝應激性肝損傷，疾病譜包括非酒精性肝脂肪變、非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis, NASH）、肝硬化和肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）。NAFLD不僅可以導致肝病殘疾和死亡，還與代謝綜合征（Metabolic syndrome, MetS）、２型糖尿�。═ype 2 diabetes mellitus, T2DM）、動脈硬化性心血管疾病以及結直腸腫瘤等的高發(fā)密切相關。隨著肥胖和MetS的流行，NAFLD已成為我國第一大慢性肝病和健康體檢肝生物化學指標異常的首要原因。并且，越來越多的HBV慢性感染者合并NAFLD，嚴重危害人民生命健康。
《非酒精性脂肪性肝病診療指南》的修訂
為了規(guī)范NAFLD的診斷、治療、篩查和隨訪，中華醫(yī)學會肝病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組于2006年組織國內有關專家制訂了《非酒精性脂肪性肝病診療指南》（第１版）。近８年來，國內外有關NAFLD診療和管理的臨床研究取得了很大進展，為此，中華醫(yī)學會肝病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組聯(lián)合中國醫(yī)師協(xié)會脂肪性肝病專家委員會對本指南再次修訂。
《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018更新版）》旨在幫助臨床醫(yī)生在NAFLD診斷、治療、篩查和隨訪中做出合理決策。
角蛋白18簡介
《指南》中提到的CK-18是指角蛋白18（K18, cytokeratin 18 或CK-18）。CK-18是在多種上皮細胞中高表達的胞內蛋白。大多數(shù)CK-18蛋白在胞內是不可溶性的，并在細胞死亡期間隨著細胞的破裂被釋放到細胞外。CK-18在細胞凋亡期間被caspase催化發(fā)生水解，為caspase所切割的片段釋放到細胞外。因此細胞外的 caspase-cleaved CK-18 （ccK-18）濃度反映了細胞凋亡的數(shù)量。同時檢測CK-18和ccK-18，可知道總細胞死亡中細胞凋亡的比例。
細胞凋亡與NAFLD
細胞死亡，包括壞死和凋亡。其中細胞壞死是非正常原因造成的細胞死亡。
與壞死不同，細胞凋亡是由體內外因素觸發(fā)細胞內預存的死亡程序而導致的細胞主動性死亡方式，是保持肝細胞穩(wěn)定的一種新陳代謝過程。但是當細胞凋亡失衡時會對肝細胞造成潛在的損傷作用。
越來越多的研究認為在NAFLD進展過程中，隨著肝細胞變性、壞死增多，細胞凋亡的比例也在增加。Feldstein等對NASH患者肝活組織標本應用TUNEL方法檢測肝細胞凋亡，發(fā)現(xiàn)凋亡明顯增加，并且細胞凋亡隨肝纖維化和脂肪性肝炎炎癥病變程度增加而增加。在NASH中，肝細胞凋亡在由單純性脂肪肝轉變?yōu)橹拘愿窝�、肝纖維化過程中起重要作用。肝細胞凋亡不僅在脂肪肝發(fā)生肝炎反應的活動中發(fā)揮促進作用。而且也是肝纖維化過程中促發(fā)肝星狀細胞活化與增殖的關鍵環(huán)節(jié)。肝細胞的凋亡，促進了肝損傷，直接加重了炎癥反應和肝纖維化程度。
CK-18的ELISA檢測方法
PEVIVA品牌的M65 ® ELISA試劑盒（產(chǎn)品編號：10020）以夾心法定量CK-18，一塊預包被了CK-18鼠源單抗的96孔板，以HRP偶聯(lián)M65抗體作為一抗，可用以評估人血清或則血漿中上皮細胞死亡情況。M30 Apoptosense® ELISA 試劑盒（產(chǎn)品編號10011）則特異性檢測在凋亡時caspase-cleavaged CK-18在Asp396形成的新表位（又稱為K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope），以此反映上皮細胞的凋亡情況。兩種檢測試劑盒的單位根據(jù)同一標準校對，可以計算caspase-cleaved和總CK-18（“M30:M65比”）。M30:M65 比值代表了細胞死亡總數(shù)中細胞凋亡細胞所占的比例。細胞凋亡導致caspase-cleaved CK-18釋放，M30:M65比值較高；然而如果細胞只是發(fā)生壞死，只有CK-18的水平是升高的，所以M30:M65比值較低。
總結
目前雖然肝臟活檢被認為是評估患病情況的標準方法，但是這種侵入式的技術會給患者帶來創(chuàng)傷，且有一定風險，不適合疾病監(jiān)測及相關機制的研究�！吨改稀芳霸絹碓蕉嗟奈墨I支持以基于血液學的方法來對NAFLD進行研究和評估，這種方式既減少了病患痛苦，又降低了研究人員采樣的難度。PEVIVA細胞死亡系列試劑盒采用血液作為樣本，是檢測病患肝細胞凋亡狀況的非入侵式方法，是實驗研究的理想選擇。
| 品牌 | 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| Peviva | 10020 | M65 ELISA 細胞死亡M65 ELISA試劑盒 |
96 wells |
| Peviva | 10011 | M30 Apoptosense ELISA 細胞凋亡M30 ApoptosenseELISA試劑盒 |
96 wells |
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