新手養(yǎng)細胞入門級注意事項

1.冷凍管應如何解凍？
取出冷凍管后，須立即放入 37 ℃ 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管的爆裂。

2.細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應馬上去除 DMSO？
除少數特別注明對 DMSO 敏感的細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有 10~15 ml 新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。
 
3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。

4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5.何謂 FBS，FCS，CS，HS？
FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 是錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （ 則是指馬血清。

6.培養(yǎng)細胞時應使用 5% 或 10% CO2？或根本沒有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中 NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的 CO2 濃度。當培養(yǎng)基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g 時，細胞培養(yǎng)時應使用 10% CO2；當培養(yǎng)基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時，則應使用 5% CO2 培養(yǎng)細胞。

7.何時須更換培養(yǎng)基？培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數據上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。
除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。
一 ℃ 16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 長期儲存。