逍鵬小課堂之FBS基礎(chǔ)問答

瀏覽次數(shù)：1713　發(fā)布日期：2019-12-30　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

歡迎大家來到---細(xì)胞培養(yǎng)知識小課堂

今天我們要講的是細(xì)胞培養(yǎng)“主角”---血清

血清是一種純天然培養(yǎng)基，含有細(xì)胞生長繁殖所需的多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多肽等，多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的生產(chǎn)。
血清的主要成分是蛋白質(zhì)，如：白蛋白，球蛋白，纖維粘連素（促進(jìn)細(xì)胞附著）、α2巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用），激素，胰島素（可促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，促細(xì)胞分裂），類胰島素生長因子（能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合，從而產(chǎn)生與胰島素相同的作用），促生長激素（細(xì)胞增殖），胎球蛋白（促細(xì)胞附著），轉(zhuǎn)鐵蛋白（能結(jié)合鐵離子，減少其毒性）。血清的組成成分與含量常常與供血動物性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件有關(guān)。
那么如何挑選合適的血清？使用血清時，需要注意哪些問題？請大家跟隨我們進(jìn)入逍鵬知識小課堂進(jìn)行學(xué)習(xí)吧~

第三課

一、胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？

取血年齡不同：牛血清按照牛取血時間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清（Foetal Bovine Serum，簡稱FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹得來的胎牛。

國產(chǎn)胎牛血清（并無明確定義，但通常以此稱）的指的是出生4-6小時，且未進(jìn)行哺乳（unsuckled）進(jìn)食的牛，有時還稱作國產(chǎn)新生牛。

新生牛血清（Newborn Calf Serum，簡稱NBCS）指的是出生14天-3個月進(jìn)行取血的牛。

成年牛血清（Adult Bovine Serum，簡稱ABS）指的是取血時牛齡通常超過12個月的牛。

以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒倚竽翗I(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響，因為牛血多為畜牧業(yè)副產(chǎn)業(yè)，并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。

組分與比例不同：這幾種不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規(guī)來說，年齡越小的牛血清，細(xì)胞培養(yǎng)效果越好。胎牛血清培養(yǎng)效果好于新生牛，且因為胎牛未進(jìn)食過母乳，所以IgG含量低。

用途與用法不同：根據(jù)細(xì)胞所需生長條件可確定。

二、如何挑選適合細(xì)胞生長的血清？

原代或是正常細(xì)胞株建議使用BI特級胎牛血清，對生長條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用專用特級胎牛血清，或胚胎干細(xì)胞專用金牌胎牛血清。

由于血清有批間差異，細(xì)胞種類不同，我們建議客戶購買前可先申請試用樣品，通過篩選得到滿意的血清批號，之后根據(jù)項目需求可進(jìn)行批量囤貨，以保證該項目所需血清質(zhì)量的一致性，可排除不同批號血清對于實驗帶來的影響。

三、如何正確保存血清？

需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱（未開封血清有效期為5年）。若存放于4℃，請勿超過1個月，若一次無法用完一瓶，建議將血清無菌分裝并冷凍。

四、如何解凍血清？

血清解凍需采用逐步解凍法：將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍，這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。

五、需要對新買的血清進(jìn)行過濾嗎？

血清在ISO13485認(rèn)證的廠房中生產(chǎn)，經(jīng)過3次0.1μm過濾，出廠經(jīng)過檢測并且會使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測試及無菌檢測，污染幾率非常低。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性，根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測，結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來的血清不需要再次進(jìn)行過濾。

六、除了對血清進(jìn)行檢測，有何更直觀的方式分辨血清質(zhì)量？

目測法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進(jìn)行區(qū)分。

顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進(jìn)口血清質(zhì)量最好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質(zhì)量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)模捎谘t蛋白的破壞氧化，會呈現(xiàn)出暗紅色，甚至咖啡色。

沉淀：血清中的沉淀主要是有纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生。沉淀產(chǎn)生的原因很多，使用時反復(fù)凍融會增加沉淀。進(jìn)口血清過濾分裝前很少反復(fù)凍融，因此成品清澈。

澄清度：進(jìn)口血清是由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡。國產(chǎn)血清絕大多數(shù)為新生牛血清，相對而言更加粘稠，顏色略深。

七、為何血清會存在批間差？如何避免此影響？

因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。

為了避免批間差異對細(xì)胞的影響，XP建議先進(jìn)行批號測試，篩選合適的批號，備好庫存（血清未開封時，在-20℃下可保存5年）。如需更換血清批次或產(chǎn)地，建議先試用后再大量訂購。

八、血清中沉淀是什么成分？造成原因有哪些？如何預(yù)防和處理沉淀？

血清中沉淀主要有：纖維蛋白（絮狀沉淀），甲胎蛋白，脂蛋白，冷凝集素，玻粘連蛋白，磷酸鈣^[1]（顯微鏡下小黑點沉淀），膽固醇等。

原因：造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活，反復(fù)凍融，長期儲存于2-8℃或者室溫。

預(yù)防措施與建議：因此不立即使用的血清應(yīng)保存在-20℃或以下。

九、血清為何要熱滅活，有必要對所有血清都滅活嗎？如何正確的進(jìn)行滅活？

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。

實驗顯示，熱滅活血清對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的，對于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用，還可能造成生長速率降低，沉淀物還會顯著增多，不利于細(xì)胞觀察。因此，若非必須，不需要對血清進(jìn)行滅活處理。

將需要進(jìn)行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對照（同體積水）使用溫度計測溫，以測得溫度為56℃時為計時起始點，加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。

好啦

本期介紹到此結(jié)束

希望能幫到大家噢~

Reference

[1] Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41

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