2019-nCoV新型冠狀病毒檢測實驗中需要使用的實驗用品清單參考

疫情期間，在各類新型冠狀病毒檢測方法中，咽拭子-試劑盒檢測因其操作方便、不需要其他設(shè)備，成本相對較低，是目前最主要的檢測方法。對于樣本的核酸檢測，常見有手工和全自動工作站，相對手動，工作站效率更高，更適合多樣本。以下我們將簡單介紹一下檢測流程，在此過程中，耐思可以提供哪些在耗材方面的協(xié)助，讓大家更直觀的了解耐思的產(chǎn)品。

 樣本的采集

“巧婦難為無米之炊”，樣本采集是所有檢測的第一步。疫情爆發(fā)后，耐思快速研發(fā)出一次性樣品采集器，成功取得相關(guān)醫(yī)療資質(zhì)，并迅速投入生產(chǎn)，保障前線所需。
 

 

一次性使用采樣器
 

該產(chǎn)品可用于新冠肺炎的口咽樣品采集，醫(yī)院、疾控中心等單位需求量大，目前NEST一次性采樣器已取得相關(guān)醫(yī)療資質(zhì)并投入生產(chǎn)，庫存充足，物流迅速，如有需求可聯(lián)系耐思銷售咨詢購買。

試劑盒核酸檢測流程

對于新冠病毒的核酸檢測步驟，參考了北京協(xié)和醫(yī)院感染內(nèi)科韓揚副研究員發(fā)表的流程解析，向奮戰(zhàn)在一線的醫(yī)護(hù)人員致敬！

1、樣本的滅活處理

兩名完成三級防護(hù)的工作人員，進(jìn)入樣本處理區(qū)或樣本處理專用實驗室，將接收到的樣本二級包裝在安全柜內(nèi)打開，檢查樣本主容器是否為嚴(yán)格密閉；對密封袋表面進(jìn)行消毒后，對送檢樣本進(jìn)行56℃下30分鐘的滅活，滅活后的樣本管需在生物安全柜內(nèi)打開最內(nèi)層的容器，將拭子保存液混勻后進(jìn)行分裝和用于核酸提取。

2、手工核酸提取操作流程（以科智達(dá)恒溫?zé)晒鈾z測法試劑盒為例）
（1）試劑配制 (在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行)

在基因擴(kuò)增實驗室的試劑配制區(qū)或單獨的普通試劑配制實驗室中，將試劑盒中所需組分解凍，振蕩混勻并短暫離心后備用。根據(jù)所檢測的樣本數(shù)量按照：緩沖液21.9μL，DNA聚合酶1μL，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.1μL配制反應(yīng)液，建議每次檢測均設(shè)置陰性對照和陽性對照。將配制好的反應(yīng)體系混勻后，按23μL量分裝到PCR 反應(yīng)管，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
 

（2）加樣（樣本處理區(qū)）

分別向不同管中加入2μL的陰性對照、樣本核酸提取液、陽性對照，終體積為25 μL/管，再分別加入25μL密封液，蓋緊反應(yīng)管，瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移至檢測區(qū)，以備PCR檢測使用。
 

 

NEST 微量離心管系列
 

NEST 吸頭系列
 

NEST 高速離心機
 

（3）采用核酸提取儀提取核酸的操作流程

因為不同品牌的工作站不同，所以沒有很統(tǒng)一的操作方法，根據(jù)核酸提取儀和試劑的說明書準(zhǔn)備好提取試劑，并按照要求回收提取好的核酸備用。今天我們就選取市面上常用的幾款工作站為例，介紹一下耐思可以提供哪些產(chǎn)品。自動工作站用的最多的，莫過于吸頭，耐思除了常規(guī)吸頭外，我們又推出了新品導(dǎo)電吸頭。
 

 

 

  

深孔板系列，可以結(jié)合排槍、高通量自動液體操作儀器和軟件，實現(xiàn)對生物樣品的高通量操作。
 

（4）PCR體系的配制、模板加樣及上機

在基因擴(kuò)增實驗室的試劑配制區(qū)或單獨的專用實驗室，配制PCR體系。根據(jù)試劑盒說明書的要求，將試劑盒的不同組分（一般包括反應(yīng)液、酶、引物等）按照各自必須的體積量進(jìn)行配制混合，充分混勻并離心后，通過傳遞窗傳遞到核酸提取和加樣區(qū)，或由專人從試劑配制實驗室送至核酸提取和加樣專用實驗室。在加樣專用生物安全柜內(nèi)，根據(jù)檢測樣本例數(shù)分裝體系到每個反應(yīng)管中，逐一將樣本核酸加入到對應(yīng)的反應(yīng)管中，并加蓋密閉好PCR反應(yīng)管；每批次檢測需要做一個陽性對照和3個陰性對照。
 

 

PCR 八連管系列
 

PCR 單管
 

在擴(kuò)增區(qū)或?qū)Ｓ脭U(kuò)增實驗室，由專人取出配制好的PCR檢測管，混勻、離心后，小心上機檢測，按照試劑盒說明書設(shè)置擴(kuò)增參數(shù)并分析判讀結(jié)果。進(jìn)行結(jié)果分析時，應(yīng)認(rèn)真閱讀試劑盒說明書，在了解該試劑盒的靈敏度、檢測方法和局限性等技術(shù)特點的基礎(chǔ)上，結(jié)合該批次陰性質(zhì)控的結(jié)果，綜合判讀樣本的檢測結(jié)果。檢測結(jié)束后，為防止可能的擴(kuò)增污染，擴(kuò)增結(jié)束后的PCR管嚴(yán)禁開蓋或帶離擴(kuò)增實驗室，應(yīng)盡快通過可密封塑料袋等容器盛裝密閉后，放入指定專用醫(yī)療垃圾桶中做進(jìn)一步處理。
 

 

八連管蓋
 

（5）全自動核酸檢測儀

此類檢測集樣本加載、核酸提取、PCR體系構(gòu)建等諸多功能于一體，可實現(xiàn)全流程自動化操作，徹底將您從繁瑣的手動操作中解放出來。
 

 

其他品牌核酸工作站，需要適配各類PCR耗材，如0.1ml和0.2ml八連管、96孔板等。
 

 

（6）廢棄物的處理

對檢測完成后的疑似病人樣本采用雙層塑料袋密封；對實驗過程中產(chǎn)生的廢液和槍頭等置于含0.5%～1%有效氯的含氯消毒液的廢液缸。上述物品經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理。詳見《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南》（第三版）。

重要提醒：鑒于2019新型冠狀病毒具有高度傳染性，檢驗人員應(yīng)在二級生物安全環(huán)境進(jìn)行檢測，個人防護(hù)按照三級生物安全要求。為避免人員感染、實驗交叉污染及陽性品氣溶膠污染，建議將以上設(shè)備放入生物安全柜中并全程在生物安全柜中進(jìn)行實驗操作，同時建議條件允許的情況下可對所采集樣本進(jìn)行56℃ 30min滅活處理后進(jìn)行核酸提取和后續(xù)檢測。

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