Inscopix在獼猴大腦背外側(cè)運(yùn)動(dòng)前皮質(zhì)實(shí)現(xiàn)頭戴式顯微鈣成像的應(yīng)用

Inscopix系列的大腦超微鈣成像系統(tǒng)一般用在嚙齒類動(dòng)物身上的居多，因?yàn)樵O(shè)備體積小，重量輕，且在實(shí)驗(yàn)時(shí)動(dòng)物可以自由活動(dòng)而成像質(zhì)量不受影響，因此受到了很多神經(jīng)科學(xué)研究者的青睞。
 
但在最近的一篇來(lái)自Inscopix公司和美國(guó)德克薩斯大學(xué)奧斯汀分校的研究人員在bioRxiv上發(fā)表的文章則描述了inscopix nVista頭戴式顯微鈣成像設(shè)備應(yīng)用在獼猴身上的研究，該研究將兩個(gè)inscopix鈣成像設(shè)備埋植在獼猴左右兩側(cè)的大腦上，對(duì)采集到的鈣離子活動(dòng)信號(hào)通過(guò)數(shù)學(xué)模型的分析解碼，實(shí)現(xiàn)了將神經(jīng)信號(hào)與行為動(dòng)作的解讀關(guān)聯(lián)。實(shí)驗(yàn)方法并不復(fù)雜，并且還實(shí)現(xiàn)在清醒可自由動(dòng)作的靈長(zhǎng)類動(dòng)物上。下面我們對(duì)這篇文章的實(shí)驗(yàn)及分析過(guò)程進(jìn)行介紹。
 
格羅貝爾生物科技公司（美國(guó)Global Bietech Inc）是Inscopix進(jìn)入中國(guó)后于2017年首次且始終授權(quán)的中國(guó)代理商，擁有幾十家國(guó)際國(guó)內(nèi)一流科研水平的實(shí)驗(yàn)室用戶服務(wù)經(jīng)驗(yàn)。始終如一高水平售后技術(shù)服務(wù)是您完成此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的根本保障，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買前與我們做更深入的技術(shù)咨詢和交流！
 
文章首先對(duì)在獼猴頭上安裝頭戴式微型顯微內(nèi)窺鏡的手術(shù)操作進(jìn)行了講解，手術(shù)環(huán)節(jié)分為兩個(gè)部分，第一是將病毒注射到感興趣的大腦區(qū)域以表達(dá)經(jīng)過(guò)基因編輯的鈣指示蛋白，第二個(gè)是將長(zhǎng)期型內(nèi)窺透鏡植入到目標(biāo)位置（圖1）。
 
對(duì)于獼猴皮質(zhì)中表達(dá)鈣指示蛋白，他們采用了兩種基于AAV的略（圖1B），一種是使用傳統(tǒng)AAV表達(dá)實(shí)現(xiàn)基于GCaMP的鈣成像，第二種是將兩種病毒混合在一起構(gòu)成AAV Tet-Off病毒系統(tǒng)。與常規(guī)策略相比，該系統(tǒng)可在較短時(shí)間內(nèi)表達(dá)較高水平的GCaMP，它的GCaMP表達(dá)是TET依賴的，因此對(duì)動(dòng)物施用強(qiáng)力霉素可暫時(shí)抑制GCaMP的表達(dá)，這對(duì)于在長(zhǎng)期成像中防止發(fā)生過(guò)度表達(dá)很重要。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，這兩種方法均可在皮質(zhì)中產(chǎn)生足夠的GCaMP6f表達(dá)，并在皮質(zhì)各個(gè)位置均有充分分布。觀察表達(dá)GCaMP的細(xì)胞的形態(tài)，發(fā)現(xiàn)在CaMK2a病毒參與下，蛋白表達(dá)偏向于興奮性錐體神經(jīng)元；而在Tet-Off病毒系統(tǒng)下，則偏于泛神經(jīng)元表達(dá)，這與以前的報(bào)道一致。與傳統(tǒng)只表達(dá)CaMK2a病毒相比，Tet-Off病毒系統(tǒng)在注射后的相同時(shí)間點(diǎn)可以觀察到更高的表達(dá)水平。
 
他們將成像區(qū)域定為大腦左右兩側(cè)的背外側(cè)運(yùn)動(dòng)前皮層（PMd）前肢區(qū)域，依靠實(shí)驗(yàn)前掃描得到的猴腦MRI圖像以及標(biāo)準(zhǔn)解剖圖集對(duì)猴腦建立立體圖像以確定實(shí)驗(yàn)坐標(biāo)。在左半球的PMd，注入Tet-Off病毒系統(tǒng)的兩種病毒；在右半球PMd，注入AAV1.CaMK2a.GCaMP6f。實(shí)驗(yàn)中對(duì)病毒注射位點(diǎn)拍照記錄，在顱骨上做基準(zhǔn)點(diǎn)標(biāo)記，并在硬腦膜切開處使用人工硬腦膜以防止切口處軟腦膜和蛛網(wǎng)膜上的心血管生成，這樣在后續(xù)埋植透鏡時(shí)能更準(zhǔn)確地找到病毒注射位置。在腦中植入的是斜端面透鏡，植入位置在皮質(zhì)下面2mm處，在猴顱骨上擰入骨螺釘，將埋入的透鏡，顯微鏡底座，以及一個(gè)定制的可以包住整個(gè)埋植透鏡的帶蓋腔室，一起用水泥/丙烯酸樹脂固定在頭骨上（圖1A）。由于顱骨切口完全用/丙烯酸樹脂密封，植入物感染風(fēng)險(xiǎn)低，幾乎不需要維護(hù)。一旦完成上述兩個(gè)手術(shù)步驟，就可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行鈣成像觀察記錄了。
 
 

   
 
細(xì)胞級(jí)別分辨率的鈣成像
 
透鏡植入手術(shù)后大約兩周就可以觀察細(xì)胞鈣活動(dòng)。這種頭戴式微型顯微鏡和植入設(shè)計(jì)的主要優(yōu)勢(shì)在于，它操作簡(jiǎn)單，插上顯微鏡即可觀察。放置顯微鏡時(shí)，猴子可舒適的坐在工學(xué)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)靈長(zhǎng)類動(dòng)物椅子上，頭部被暫時(shí)限制活動(dòng)以完成微型顯微鏡對(duì)接，將軟墊靠在猴頭側(cè)面，將腔蓋拿開，取下微型鏡底板上的保護(hù)蓋，將微型鏡對(duì)接至底板，擰緊固定螺釘，不到2分鐘即可完成整個(gè)操作，然后放開動(dòng)物頭部開始成像。
 
在透鏡植入兩周后進(jìn)行的第一個(gè)成像過(guò)程中，研究人員觀察到了表達(dá)GCaMP的細(xì)胞和相應(yīng)的細(xì)胞鈣活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)猴進(jìn)行伸手任務(wù)，成像觀察4周后，活動(dòng)細(xì)胞數(shù)量開始上升并達(dá)到相對(duì)穩(wěn)定的值（圖1C-F）。成像過(guò)程中，動(dòng)物頭部完全不受約束，可自由移動(dòng)和咀嚼食物。盡管實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的下頜，頭部和身體有明顯的運(yùn)動(dòng)，但成像視野還是非常穩(wěn)定的，僅通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的剛性平動(dòng)校正算法就可在整個(gè)記錄過(guò)程中精確記錄幀。實(shí)驗(yàn)期間，在所有記錄的視頻幀中，應(yīng)用校正值的中位數(shù)為0.75μm，比成像細(xì)胞的平均大小要小一個(gè)數(shù)量級(jí)。運(yùn)動(dòng)校正后，頭部運(yùn)動(dòng)與視野平移之間的微小誤差可以完全緩解。
 
數(shù)據(jù)分析使用了CNMFe（constrained nonnegative matrix factorization，一種用于從單光子微內(nèi)窺鏡鈣成像數(shù)據(jù)中識(shí)別細(xì)胞的常用算法）來(lái)識(shí)別單個(gè)細(xì)胞并提取其細(xì)胞鈣活動(dòng)。在展示的左半球記錄示例中，算法確定了106個(gè)單細(xì)胞（圖1C-D）。鈣事件具有足以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)事件檢測(cè)算法的信噪比，且鈣離子活動(dòng)符合預(yù)期的典型模式，有快速上升和指數(shù)衰減的特性（圖1E）。在這個(gè)記錄里（圖1F），整個(gè)神經(jīng)元群中測(cè)到的信噪比和事件發(fā)生率均與在嚙齒動(dòng)物模型的鈣成像研究中通常觀察到結(jié)果相似。右半球PMd的成像細(xì)胞明顯減少，可能是由于透鏡相對(duì)于表達(dá)GCaMP的細(xì)胞區(qū)域的放置位置不是最佳。但從這些細(xì)胞中檢測(cè)到的鈣事件與從左半球細(xì)胞中觀察到的信噪比和事件發(fā)生率是相似的。
 
 
在長(zhǎng)期鈣活動(dòng)記錄中追蹤單個(gè)神經(jīng)元群
 
研究人員在不到8個(gè)月中一共進(jìn)行了66次成像記錄，在開始4個(gè)月中連續(xù)進(jìn)行了42次記錄（圖2A），之后暫停。動(dòng)物全身注射熒光染料以進(jìn)行鎮(zhèn)靜血流成像，經(jīng)一個(gè)月后，恢復(fù)了鈣活動(dòng)成像，但血液熒光染料完全干擾了檢測(cè)GCaMP熒光信號(hào)的能力。研究人員在第6個(gè)月繼續(xù)進(jìn)行鈣成像，測(cè)試Dox給藥對(duì)測(cè)得的鈣活動(dòng)的影響。從第0天到第76天的32個(gè)成像階段中（圖2A），結(jié)果令人滿意，總體成像質(zhì)量和鈣活動(dòng)保持穩(wěn)定（圖2B-C）。左半球PMd中識(shí)別出的細(xì)胞數(shù)在間隔的記錄之間波動(dòng)，但總體相對(duì)穩(wěn)定，記錄細(xì)胞中位數(shù)為104個(gè) [四分位數(shù)IQR 91-113] （圖2B）。信噪比和檢出鈣事件率在各試驗(yàn)記錄中也是相對(duì)穩(wěn)定的，在右半球PMd的成像細(xì)胞中也觀察到了相似的穩(wěn)定性（圖2C）。
 
比較左右半球細(xì)胞群在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的鈣事件衰減，發(fā)現(xiàn)左半球的衰減明顯比右半球慢，這在兩個(gè)半球的SNR參數(shù)相同的情況下，表明左半球高表達(dá)GCaMP的細(xì)胞數(shù)量比右半球多，這也與組織學(xué)結(jié)果一致，表明在注射后的相同時(shí)間點(diǎn)，Tet-Off病毒系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生比常規(guī)CaMK2a病毒策略更高水平的表達(dá)。鑒于GCaMP過(guò)度表達(dá)會(huì)引發(fā)癲癇和細(xì)胞毒性，因此對(duì)于長(zhǎng)期成像實(shí)驗(yàn)而言，將表達(dá)水平保持在合理范圍內(nèi)非常重要。研究人員另外測(cè)試了Dox給藥對(duì)測(cè)得的鈣動(dòng)力學(xué)的影響。如預(yù)期的那樣，Dox的使用導(dǎo)致GCaMP表達(dá)水平顯著降低。使用Dox 8天后停用3天，鑒定出的細(xì)胞數(shù)量從75減少到0，施加Dox還會(huì)加快鈣事件的衰減。停用Dox大約40天后，整個(gè)視野的平均熒光，鑒定的細(xì)胞數(shù)量和熒光衰減都恢復(fù)到Dox之前的水平。在第一次記錄算起的第8個(gè)月進(jìn)行的成像記錄中，成像質(zhì)量，鈣動(dòng)力學(xué)和事件發(fā)生率與前4個(gè)月記錄的結(jié)果相當(dāng)。這些結(jié)果表明，Tet-Off病毒策略表達(dá)GCaMP可在長(zhǎng)達(dá)數(shù)月的長(zhǎng)期成像中將指示蛋白表達(dá)維持在可接受水平內(nèi)。
 
 

   
 
因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中的成像質(zhì)量和鈣活動(dòng)檢測(cè)的整體穩(wěn)定性比較好，研究人員嘗試追蹤單個(gè)神經(jīng)元，這是鈣成像相比電生理的主要優(yōu)勢(shì)。對(duì)兩個(gè)在不同時(shí)間點(diǎn)記錄的鈣活動(dòng)錄像，他們首先用CNMFe提取兩次記錄中的細(xì)胞圖，記錄細(xì)胞位置，這樣每個(gè)細(xì)胞就有相對(duì)于其他細(xì)胞的相對(duì)位置（圖2D）。通過(guò)計(jì)算兩組數(shù)據(jù)中的關(guān)聯(lián)位置，檢測(cè)推算其中的相同細(xì)胞�？臻g相關(guān)性分?jǐn)?shù)高于閾值的細(xì)胞對(duì)被推定為相同細(xì)胞。對(duì)于圖示的記錄匹配，實(shí)驗(yàn)方法能夠?qū)⒌?9天成像的細(xì)胞中的63％識(shí)別為第36天成像的相同細(xì)胞。在對(duì)所有成像進(jìn)行計(jì)算后，在最小間隔1-4天的記錄中，有中值約為70％的細(xì)胞可確認(rèn)為同一細(xì)胞，在間隔67-73天的記錄中，有約40％為同一細(xì)胞（圖2E）。進(jìn)一步嘗試是否可以通過(guò)多個(gè)連續(xù)的成像記錄而不是簡(jiǎn)單地通過(guò)任何兩個(gè)記錄來(lái)追蹤相同神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)研究了7個(gè)成像記錄的集合，跨越大約3周時(shí)間，應(yīng)用自定義縱向匹配算法（圖2F），在多個(gè)成像記錄中跟蹤相同的神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)有68個(gè)細(xì)胞只在一個(gè)記錄里活躍，有17個(gè)細(xì)胞7個(gè)記錄里都活躍。這些結(jié)果證實(shí)了這種成像方法可以在數(shù)月的時(shí)間里對(duì)活動(dòng)獼猴腦中大量神經(jīng)元鈣活動(dòng)進(jìn)行成像，且成像質(zhì)量具有足夠的穩(wěn)定性，可以長(zhǎng)時(shí)間縱向追蹤單個(gè)神經(jīng)元。
 
 
綜合神經(jīng)元鈣活動(dòng)，解碼自然伸手動(dòng)作
 
接下來(lái)，研究人員將神經(jīng)元的鈣離子活動(dòng)與動(dòng)物動(dòng)作進(jìn)行直接關(guān)聯(lián)。首先訓(xùn)練動(dòng)物的伸手動(dòng)作，在動(dòng)物面前有左右兩個(gè)位置，隨機(jī)交替放置食物獎(jiǎng)勵(lì)，動(dòng)物伸手取食（圖3A）。根據(jù)先前的電生理實(shí)驗(yàn)研究，預(yù)期是在動(dòng)物伸出左手或右手時(shí)，其神經(jīng)元活動(dòng)對(duì)其伸手方向有選擇性活躍，對(duì)側(cè)手臂活動(dòng)對(duì)神經(jīng)活動(dòng)有響應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了期望，在圖表展示的左半球記錄中，動(dòng)物正用右臂伸手，幾個(gè)神經(jīng)元在向區(qū)域1和區(qū)域2伸手期間，鈣離子活動(dòng)均有增加且發(fā)生鈣事件的可能性更高，其他細(xì)胞則表現(xiàn)出對(duì)伸手到區(qū)域1相比區(qū)域2有更多的鈣活動(dòng)，反之亦然。圖表的三個(gè)示例清楚地展示了神經(jīng)元獨(dú)特的選擇傾向（圖3B），無(wú)論是鈣事件還是在鈣離子活動(dòng)變化上。
 
在示例記錄里可觀察到，整個(gè)成像細(xì)胞群體的鈣活動(dòng)變化與伸手動(dòng)作調(diào)節(jié)的多樣性，大多數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)出與一個(gè)或兩個(gè)伸手方向相關(guān)的活躍變化（圖3C）。研究人員計(jì)算了一個(gè)調(diào)整指數(shù)，來(lái)捕捉每個(gè)細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞群中對(duì)伸手方向的選擇性程度（圖3D）。實(shí)驗(yàn)完成后，他們用該指數(shù)將細(xì)胞分為1區(qū)選擇性，2區(qū)選擇性和非選擇性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在78個(gè)細(xì)胞中有35個(gè)為選擇性細(xì)胞，1區(qū)占20％，2區(qū)占17％。他們將這種方法應(yīng)用每個(gè)記錄中，發(fā)現(xiàn)在不同記錄中存在相同比例細(xì)胞對(duì)區(qū)域1和區(qū)域2有選擇性（圖3E）。將所有記錄里的細(xì)胞用該指數(shù)分類，然后將經(jīng)過(guò)分類細(xì)胞的分布重新映射到大腦的成像視野里，評(píng)估PMd是否在空間上組織了伸手方向的選擇性（圖3F）。在這些選擇性映射圖中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何明顯的空間組織。為了測(cè)試具有類似選擇性的細(xì)胞是否傾向于分布位置更靠近一些，研究人員計(jì)算了一個(gè)聚類指標(biāo)，即最鄰近細(xì)胞具有相似選擇性的頻率。度量值顯著大于0.5表明類似選擇性細(xì)胞群集。對(duì)于圖3F中所示的記錄，聚類指標(biāo)為0.57，但與0.5沒(méi)有顯著差異。本研究中使用的GRIN斜端面透鏡允許同時(shí)成像散布在多個(gè)皮質(zhì)層上的細(xì)胞。在評(píng)估了方向選擇性細(xì)胞所占比例與特定皮質(zhì)層的關(guān)系后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在視野內(nèi)皮質(zhì)的全部深度上，具選擇性細(xì)胞的比例相當(dāng)均勻。
 
 

   
 
考慮到所記錄的細(xì)胞群中對(duì)伸手位置選擇性的鈣活動(dòng)，研究人員猜想是否可以用細(xì)胞群體鈣活動(dòng)經(jīng)多次試驗(yàn)來(lái)逐步解碼動(dòng)物伸手方向。使用偏最小二乘判別分析和留一法交叉驗(yàn)證，從400 ms（幀長(zhǎng)度100 ms）記錄里所有被識(shí)別細(xì)胞的連續(xù)鈣活動(dòng)變化中解碼伸手方向（圖3G）。解碼結(jié)果的準(zhǔn)確率遠(yuǎn)大于隨機(jī)水平，并在手進(jìn)入相應(yīng)選擇區(qū)域時(shí)達(dá)到峰值。不同記錄之間的解碼準(zhǔn)確性保持穩(wěn)定。盡管相對(duì)于連續(xù)鈣活動(dòng)記錄，鈣事件數(shù)據(jù)量較少，但基于鈣事件解碼的準(zhǔn)確性也大大超過(guò)隨機(jī)概率（圖3G）。如同預(yù)期，解碼精度取決于訓(xùn)練解碼器所用的信元數(shù)量，即便只有一個(gè)訓(xùn)練信元，準(zhǔn)確性依然高于隨機(jī)水平。
 
 
跟蹤隨時(shí)間變化的細(xì)胞群體鈣離子活動(dòng)與動(dòng)物行為之間的關(guān)系
 
已經(jīng)確定猴腦左右半球PMd神經(jīng)元鈣離子活動(dòng)均表現(xiàn)出對(duì)伸手方向具有選擇性（圖3），并驗(yàn)證了鈣成像方法跨時(shí)間縱向跟蹤神經(jīng)元群的能力（圖2），研究人員接下來(lái)研究單個(gè)神經(jīng)元的方向選擇性隨時(shí)間推移的變化或保持穩(wěn)定的程度。他們將分析重點(diǎn)放在了左半球的部分記錄上，在這部分記錄里動(dòng)物完成了足夠數(shù)量的伸手試驗(yàn)，跨2個(gè)星期，進(jìn)行了5次記錄（圖4A）。圖示記錄中，已在空間上標(biāo)定了它們的細(xì)胞映射，并推定了82個(gè)同一細(xì)胞（圖4A），然后比較兩個(gè)記錄里同一細(xì)胞的調(diào)整指數(shù)，觀察到顯著的相關(guān)性，且總體調(diào)整指數(shù)沒(méi)有變化（圖4B）。時(shí)間間隔增加后，兩個(gè)記錄之間調(diào)整指數(shù)的相關(guān)性仍然很高，調(diào)整指數(shù)變化仍然很低，這表明PMd細(xì)胞經(jīng)過(guò)2周時(shí)間仍具有穩(wěn)定的方向選擇性（圖4C）。
 
 

   
根據(jù)跨時(shí)間追蹤細(xì)胞測(cè)得的總體調(diào)整指數(shù)相對(duì)穩(wěn)定，研究人員預(yù)測(cè)，用特定記錄的鈣活動(dòng)變化訓(xùn)練解碼器，然后對(duì)記錄自其他時(shí)間點(diǎn)的鈣離子活動(dòng)進(jìn)行解碼也會(huì)表現(xiàn)得相當(dāng)好。示例的兩個(gè)記錄，在對(duì)原記錄和跨一天記錄的測(cè)試中，解碼精度均遠(yuǎn)高于隨機(jī)水平（圖4D）。把記錄間隔時(shí)間加長(zhǎng)，大多數(shù)情況下，峰值解碼精度仍高于隨機(jī)水平（圖4E），這表明PMd對(duì)伸手方向的編碼在幾天到幾周內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。對(duì)這些神經(jīng)元的縱向跟蹤增進(jìn)了我們對(duì)神經(jīng)活動(dòng)與行為之間動(dòng)力學(xué)關(guān)系的理解。
 
 
背外側(cè)運(yùn)動(dòng)前皮質(zhì)多個(gè)部位的雙側(cè)鈣離子成像
 
迄今得到的結(jié)果分別來(lái)自左半球或右半球PMd，而動(dòng)物伸展手臂在記錄半球?qū)��?cè)。在第20天到第76天的記錄中，研究人員還同時(shí)從兩個(gè)半球成像（圖5）。由于微型鏡的體積小，頭部上有足夠的空間來(lái)安裝兩個(gè)微型鏡，如果研究有需要甚至可以容納更多的鏡頭。為了利用雙邊成像功能，首先對(duì)動(dòng)物進(jìn)行訓(xùn)練，使其執(zhí)行類似前述實(shí)驗(yàn)的動(dòng)作，只不過(guò)訓(xùn)練動(dòng)物用右臂伸到區(qū)域1，用左臂伸到區(qū)域2（圖5A）。這樣與左右半球PMd的同時(shí)記錄相結(jié)合，使他們能夠在逐次試驗(yàn)的基礎(chǔ)上研究手臂伸張如何在大腦兩側(cè)進(jìn)行編碼的。
 
實(shí)驗(yàn)證明左右半球均有同側(cè)或?qū)��?cè)伸手選擇性的細(xì)胞鈣活動(dòng)（圖5B-C）。在圖5所示的雙邊記錄中，有些細(xì)胞在同側(cè)伸手和對(duì)側(cè)伸手時(shí)均有增加的鈣活動(dòng)，有些細(xì)胞在對(duì)側(cè)伸手時(shí)鈣離子更加活躍，有些則在同側(cè)伸手時(shí)鈣離子更加活躍。每個(gè)半球的三個(gè)示例清楚展示了這些選擇性（圖5B）。研究人員在雙邊成像的細(xì)胞群中觀察到了大量與伸手相關(guān)的鈣離子活動(dòng)調(diào)節(jié)差異（圖5C）。大多數(shù)細(xì)胞顯示出與對(duì)側(cè)伸手有關(guān)的顯著活動(dòng)調(diào)節(jié)，但仍有少數(shù)細(xì)胞對(duì)同側(cè)伸手敏感。
 
 

   
 
鑒于在兩個(gè)半球記錄中的神經(jīng)元對(duì)同側(cè)和對(duì)側(cè)伸手均存在選擇性，研究人員嘗試是否可以使用雙側(cè)整體的細(xì)胞鈣活動(dòng)來(lái)解碼發(fā)出動(dòng)作的手臂身份。如前所述，他們采用留一法交叉驗(yàn)證的模型，以100毫秒幀的400毫秒幻燈片連續(xù)鈣活動(dòng)來(lái)解碼左臂或右臂動(dòng)作。在此示例記錄中，解碼精度遠(yuǎn)高于隨機(jī)，并在進(jìn)入?yún)^(qū)域時(shí)達(dá)到峰值（圖5D）。峰值解碼精度在整個(gè)記錄中穩(wěn)定（圖5E）。這些結(jié)果證實(shí)了同步多點(diǎn)成像的可行，并給出了初步數(shù)據(jù)，應(yīng)用這些功能加深了我們對(duì)雙邊編碼伸手動(dòng)作的理解。
 
 
參考文獻(xiàn)：
Anil Bollimunta, Samantha R. Santacruz, Ryan W. Eaton, Pei S. Xu, John H. Morrison, Karen A. Moxon, Jose M. Carmena, Jonathan J. Nassi. Head-mounted microendoscopic calcium imaging in dorsal premotor cortex of behaving rhesus macaque. 
https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.04.10.996116v1
 
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