纖維二糖酶（cellobiase）活性ELISA試劑盒使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。
試劑盒性能

. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0. U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于5%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

結果判斷

繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒組成

樣品收集、處理及保存方法

. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行。

3. 植物萃取液或其它相關樣本：請000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。

4. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份的20×洗滌緩沖液加9份的蒸餾水。

洗板方法

. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5次。

纖維二糖酶(cellobiase)Elisa試劑盒操作步驟

. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔先加待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。

7. 每孔加入終止液50μL，5min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。注意事項：
． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
0. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。