ICR Swabs對(duì)隔離器手套表面低水平微生物的檢測(cè)應(yīng)用

ICR Swabs對(duì)隔離器手套表面低水平微生物的檢測(cè)應(yīng)用
 
在日常的環(huán)境監(jiān)測(cè)中，接觸碟法和棉簽擦拭法是對(duì)藥品無(wú)菌灌裝線進(jìn)行表面微生物監(jiān)測(cè)的常用方法，在現(xiàn)行的歐洲和美國(guó)GMP指南中都均有推薦和介紹，但由于取樣方法、試驗(yàn)表面和測(cè)試微生物的不同，擦拭法和接觸碟取樣在微生物的回收率上會(huì)存在一些差異。
這種差異在USP <1116>中也有說(shuō)明，但兩種方法都可檢測(cè)低水平的微生物污染，尤其是在A級(jí)潔凈區(qū)和隔離器中。
 
目前，使用隔離器進(jìn)行藥品的生產(chǎn)，已成為制藥行業(yè)的一種顯著趨勢(shì)，因此對(duì)隔離器中的試驗(yàn)表面進(jìn)行微生物檢測(cè)是十分必要的，尤其是隔離器專用的Neoprene®手套。因此，為證明ICR Swabs取樣拭子可有效的檢測(cè)出隔離器Neoprene®手套表面的低水平微生物污染，我們進(jìn)行了專門的實(shí)驗(yàn)研究。
 
材料和方法
 
將Neoprene®手套試樣清潔并高壓滅菌。取4種試驗(yàn)微生物在兩種不同稀釋度的菌懸液，在試樣表面接種，使其均勻分布。表1列出了所選取的試驗(yàn)微生物以及接種在測(cè)試表面的菌落數(shù)CFU。革蘭氏陰性菌的接種量會(huì)更高一些，因?yàn)樗鼈儗?duì)接種表面材料的干燥過(guò)程更為敏感。
 
使用平板涂布法在90mm TSA平板上接種，以確定接種在試樣表面的菌落數(shù)CFU。

表1：所選取的試驗(yàn)菌株和接種在100ul菌懸液中的菌落數(shù)CFU
 
接下來(lái)，在超凈工作臺(tái)中，我們將每個(gè)表面試樣干燥60分鐘，并用以下不同方法對(duì)干燥后的表面試樣上的試驗(yàn)微生物進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)，操作步驟描述如下，如圖1所示。
 
1）接觸碟法：用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（含卵磷脂、聚山梨酯80、組氨酸和硫代硫酸鈉）對(duì)干燥表面試樣進(jìn)行取樣，在測(cè)試表面均勻按壓10秒。所有平板都在30–35°C培養(yǎng)長(zhǎng)達(dá)七天，并每日進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
 
3）棉簽擦拭法：用已預(yù)濕潤(rùn)的ICR Swabs取樣拭子頭在干燥表面上小心沿水平和垂直方向擦拭取樣。隨后將ICR Swabs頂部的TSB液體培養(yǎng)基擠進(jìn)拭子頭的試管中，由于干燥可能會(huì)延長(zhǎng)微生物生長(zhǎng)的遲緩期，所以將Swabs取樣拭子30–35°C培養(yǎng)長(zhǎng)達(dá)七天，并每日目視檢查觀察試管的濁度情況。
 

培養(yǎng)長(zhǎng)達(dá)7天并每日進(jìn)行觀察（ICR接觸碟通過(guò)菌落數(shù)CFU來(lái)計(jì)數(shù)，Swabs取樣拭子通過(guò)觀察培養(yǎng)基濁度測(cè)定）
 
圖1. 通過(guò)TSA w. LTHThio contact-ICR+接觸碟和ICR Swabs取樣拭子對(duì)隔離器Neoprene手套試樣表面上的微生物檢測(cè)的操作步驟
 
結(jié)果和討論
使用ICR Swabs取樣拭子與ICR接觸碟在隔離器Neoprene手套表面取樣的檢測(cè)率
 
為確認(rèn)ICR Swabs取樣拭子可以有效的檢測(cè)到Neoprene®手套表面的低水平微生物，我們將試驗(yàn)中呈陽(yáng)性的ICR Swabs試樣與ICR接觸碟進(jìn)行了比較。如圖2所示，ICR Swabs和ICR接觸碟所呈現(xiàn)的陽(yáng)性（22）樣品總數(shù)相同。
 
在Neoprene表面接觸碟和ICR Swabs取樣拭子的陽(yáng)性試樣數(shù)量

圖2：使用ICR接觸碟和ICR Swabs取樣拭子在隔離器Neoprene®手套表面取樣的陽(yáng)性樣品檢測(cè)率及接種試驗(yàn)菌株的平均菌落數(shù)CFU
 
 
在接種特定試驗(yàn)菌株的菌懸液樣品中，使用接觸碟都檢測(cè)到了≥5CFU的情況，ICR Swabs取樣拭子也都為陽(yáng)性，如金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌樣品（見(jiàn)表2）。在檢測(cè)大腸桿菌樣品時(shí)，接觸碟有檢測(cè)到菌落數(shù)為2CFU和1CFU的情況，而ICR Swabs取樣拭子的檢測(cè)結(jié)果為3組均顯示陽(yáng)性結(jié)果。

表2：ICR接觸碟在隔離器Neoprene®手套表面取樣的微生物菌落數(shù)CFU回收率及ICR Swabs取樣拭子呈陽(yáng)性的樣品數(shù)量結(jié)果
 
結(jié)論
本研究的結(jié)果表明，ICR Swabs取樣拭子可有效檢測(cè)隔離器Neoprene®手套表面低水平革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的微生物污染，并表現(xiàn)出可靠的生長(zhǎng)結(jié)果。（這一段需要文本化處理）
 
ICR Swabs取樣拭子和我們常見(jiàn)的棉簽不同。
首先，它使用三層無(wú)菌包裝，且最內(nèi)層包裝可耐受VHP滅菌；
其次，采用聚酯的采樣頭，并且已使用無(wú)菌氯化鈉溶液預(yù)潤(rùn)濕，采樣后在表面沒(méi)有殘留，使用后表面也無(wú)需清潔；
再次，拭子頭部預(yù)灌裝了含中和劑的TSB，采樣后折斷閥門，TSB會(huì)直接流入下面的試管，不需要再轉(zhuǎn)移拭子。
最后，按照法規(guī)的要求，A級(jí)區(qū)表面是不得檢出微生物的，ICR Swabs可對(duì)表面擦拭進(jìn)行陰陽(yáng)性的檢查，可有效的解決拭子采樣回收率的問(wèn)題，也很好的解決了由于操作步驟復(fù)雜所帶來(lái)的假陽(yáng)性的污染風(fēng)險(xiǎn)。
 

（這張截圖里的ICR Swab改為ICR Swab環(huán)境監(jiān)測(cè)預(yù)制培養(yǎng)基）