熒光素酶報告基因用品的選擇與應用

       一 、什么是熒光素酶報告基因？

 

       報告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達產(chǎn)物容易被檢測，并且能與內源性背景蛋白相區(qū)別的基因，通過它的表達產(chǎn)物來標定目的基因的表達調控。

 

 

       而理想的報告基因必須具備以下幾個條件：

 

       1.編碼的表達產(chǎn)物必須與細胞內源性的所有基因相區(qū)別，編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細胞的干預。

       2.有快速簡便、經(jīng)濟、靈敏的檢測方法，且重現(xiàn)性好、結果可靠，測量數(shù)據(jù)應該有較寬的線性范圍。

       3.細胞內的其他基因產(chǎn)物不會干擾報告基因產(chǎn)物的檢測，同時報告基因的表達也不改變宿主細胞的生理功能。

 

       常用的報告基因有：

 

       氯霉素乙酰轉移酶 （CAT），氯霉素乙酰轉移酶 （CAT），人生長激素（hGH），分泌型堿性磷酸酶（SEAP），熒光素酶（Luciferase），熒光蛋白。今天我們就來說說熒光素酶報告基因。

 

       熒光素酶（Luciferase）是自然界中能發(fā)出熒光的酶的統(tǒng)稱。他們可以通過酶促反應催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光。熒光素酶因其便于檢測和靈敏度高等特性常做為報告基因被廣泛用于生化檢測實驗中。
 

       其中應用最廣泛的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase ）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase），兩者可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光，且兩種光吸收波長不同，檢測互不干擾，因此可在同一個化學反應體系中同時使用，由此雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)受到廣泛青睞。

 

       了解了什么是報告基因和熒光素酶后，我們來看看什么是熒光素酶報告基因。

 

       熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。這種報告系統(tǒng)，是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。分單熒光素酶報告基因和雙熒光素酶報告基因。

 

       雙熒光素酶報告基團主要應用方向有：

 

       1.驗證microRNA同mRNA靶向互作；

       2.驗證microRNA同lncRNA靶向互作；

       3.啟動子結構分析

       4.啟動子SNP分析

       5.驗證特定轉錄因子同其調控序列的作用

       6.分析信號通路是否激活等。

 

       二 如何選擇熒光素酶產(chǎn)品？

 

       我們知道有單熒光素酶報告基因和雙熒光素酶報告基因，我們就需要根據(jù)自己的實驗需要構建載體，首先我們需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我們的實驗設計方案和目的。一般來說，雙熒光素酶體系應用于：

 

       （1）監(jiān)測細胞數(shù)量（實驗前&實驗后，例如細胞毒性的影響）

 

       （2）評估轉染效率，消除組間轉染效率的影響

 

       （3）分析實驗結果的特異性

 

       （4）穩(wěn)定細胞系實驗中需檢測不同因子對穩(wěn)定細胞系的影響，用對照（雙熒光素酶體系）去檢測可能的細胞毒性以及對特異性的影響

 

       單熒光素酶系統(tǒng)則適用于：

 

       （1）同一實驗組進行多次檢測分析（活細胞中監(jiān)測時間曲線動態(tài)分析）

 

       （2）穩(wěn)定細胞系，轉染/轉導效率在穩(wěn)定細胞系中并不非常重要

 

       艾美捷科技作為專業(yè)的生命科學領域解決方案供應商，為您推薦Genecopoeia品牌的熒光素酶相關產(chǎn)品，極大滿足您各方面的需求。

 

       如果您的實驗需要構建雙熒光素酶報告載體，我們有下列產(chǎn)品供您挑選：

 

       1.我們有雙熒光素酶報告載體產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	產(chǎn)品描述
pEZX-FR01	ZX001	10ug	包含螢火蟲熒光素酶(Fluc)和海腎熒光素酶(Rluc)的報告載體
pEZX-FR02	ZX002	10ug
pEZX-FR03	ZX003	10ug

       2.還有分泌型堿性磷酸酶SEAP報告基因載體的產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	產(chǎn)品描述
pEZX-GN01	ZX101	10ug	包含Gluc和SEAP的報告載體
pEZX-GN03	ZX102	10ug
pEZX-GA01	ZX103	10ug
pEZX-GA02	ZX104	10ug
pEZX-GA03	ZX105	10ug
pEZX-LvGN01	ZX106	10ug	包含Gluc和SEAP的報告載體 (lentiviral)
pEZX-LvGA01	ZX107	10ug

 

       如果您需要檢測熒光素酶相關的產(chǎn)品，我們也有：

 

       （1）雙熒光素酶活性檢測產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品描述
Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0	LF001	100 rxns	可方便、高效檢測螢火蟲和海腎熒光素酶活性。
	LF002	300 rxns
	LF003	1000 rxns
Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit	LF004	100 rxns	可方便、高效檢測螢火蟲和海腎熒光素酶活性。
	LF005	300 rxns
	LF006	1000 rxns

 

       （2） 單熒光素酶檢測
 

       （3）穩(wěn)定型雙熒光素酶活性檢測產(chǎn)品，適用于高通量熒光素酶活性檢測
 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品描述
Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit	LF013	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑盒，適用于高通量的螢火蟲（FLuc）和海腎（Rluc）熒光素酶的活性檢測。
	LF014	30 mL
	LF015	100 mL
Luc-Pair™ Firefly Luciferase HT Assay Kit	LF016	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑盒，適用于高通量的螢火蟲（FLuc）熒光素酶的活性檢測。
	LF017	30 mL
	LF018	100 mL
Luc-Pair™ Renilla Luciferase HT Assay Kit	LF019	10 mL	穩(wěn)定型熒光素酶檢測試劑盒，適用于高通量的海腎（RLuc）熒光素酶的活性檢測。
	LF020	30 mL
	LF021	100 mL

 

       （4）分泌型熒光素酶和堿性磷酸酶活性檢測產(chǎn)品

 

     
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