Celigo成像分析技術(shù)在細(xì)胞增殖中的應(yīng)用
瀏覽次數(shù):2966 發(fā)布日期:2020-8-31
來源:Nexcelom
細(xì)胞增殖是腫瘤研究的必備實(shí)驗(yàn)之一。最簡(jiǎn)單直接的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法就是在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),但是在96孔板甚至384孔板的實(shí)驗(yàn)設(shè)置下,這無疑是難以操作的。于是,研究者們更傾向于用間接方法研究細(xì)胞增殖,比如基于線粒體內(nèi)脫氫酶還原能力的MTT, MTS, CCK-8法,還有基于胞內(nèi)ATP水平的CellTiter-Glo, ATPlite等。原理上,這些方法都是以細(xì)胞的代謝水平來代表細(xì)胞數(shù)量。但是大家有沒有懷疑過這些間接方法真能準(zhǔn)確反映細(xì)胞的生長狀態(tài)嗎?
美國Genentech公司的科學(xué)家對(duì)這一問題進(jìn)行了深入的研究。在2013年發(fā)表的一篇文獻(xiàn)中,作者選擇了兩種最常見的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法 – MTS和 CellTiter-Glo和直接細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行比較,得到了意想不到的結(jié)果。
如上圖所示,HT29細(xì)胞被6種不同藥物處理48小時(shí)后用不同方法對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行了分析。從生長曲線來看,這三種方法得到的結(jié)果之間有不小的差異。比如Etoposide( 細(xì)胞周期特異性的抗腫瘤藥),雖然最高與最低劑量得到的殺傷效率分別相同,但細(xì)胞計(jì)數(shù)與另兩種方法的曲線趨勢(shì)完全不同,所得IC50也小得多。又比如Gemcitabine(DNA合成抑制劑), 細(xì)胞計(jì)數(shù)所測(cè)得的最高劑量殺傷效率比另兩種方法測(cè)得的要高得多?傮w來說,與細(xì)胞計(jì)數(shù)相比較時(shí),MTS和CellTiter-Glo會(huì)不同程度地低估藥物殺傷效率。
那造成這些差異的原因是什么呢?在文章的開頭我們提到了,MTS和CellTiter-Glo都是基于細(xì)胞代謝水平的檢測(cè)方法。這就出現(xiàn)了一個(gè)bug: 如果一種藥物直接對(duì)細(xì)胞代謝有影響,會(huì)有什么樣的結(jié)果呢?作者隨后進(jìn)行了一系列深入研究,得出結(jié)論:當(dāng)藥物造成細(xì)胞周期阻滯時(shí),反映細(xì)胞代謝水平的信號(hào)與細(xì)胞數(shù)之間不再成線性關(guān)系。此時(shí)細(xì)胞內(nèi)的ATP和脫氫酶水平均會(huì)顯著上升,導(dǎo)致MTS和CellTiter-Glo得到更高的信號(hào)值,從而高估細(xì)胞數(shù)量。
謎題解開了,不過也給小伙伴們帶來了一個(gè)煩惱:今后如何再愉快地做細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)?zāi)兀渴謩?dòng)數(shù)細(xì)胞實(shí)在太痛苦了。
美國Nexcelom公司的一款名為Celigo的神器了解一下:
無標(biāo)記細(xì)胞增殖只用到了Celigo的明場(chǎng)通道,也僅僅是該神器眾多應(yīng)用中最基本的一個(gè)。除了明場(chǎng),Celigo還配置有4個(gè)熒光通道(藍(lán)、綠、紅和遠(yuǎn)紅),為實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)提供了無限可能。
目前Nexcelom已開發(fā)出在細(xì)胞健康、腫瘤免疫、病毒學(xué)、細(xì)胞株構(gòu)建、干細(xì)胞、3D腫瘤球檢測(cè)等領(lǐng)域的數(shù)十種Celigo應(yīng)用。感興趣的小伙伴們可以和我們聯(lián)系哦!
電話:021-5886 0038
郵箱:info@nexcelom.com.cn