Molecular Probes熒光標(biāo)記試劑在活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

• 可以觀察動(dòng)態(tài)細(xì)胞過程的發(fā)生
• 能使用多色檢測(cè)同時(shí)對(duì)幾個(gè)細(xì)胞過程和細(xì)胞功能進(jìn)行研究和成像
• 可研究細(xì)胞在其原生環(huán)境中的結(jié)構(gòu)，從而獲得更接近體內(nèi)環(huán)境的更真實(shí)結(jié)果
• 實(shí)現(xiàn)隨時(shí)間追蹤細(xì)胞生物分子和結(jié)構(gòu)
• 可觀察細(xì)胞之間的相互作用
• 讓細(xì)胞酶和其他胞質(zhì)生物分子保留在細(xì)胞中

• 必須有一種特定的方法來(lái)以最小的毒性標(biāo)記您的研究靶標(biāo)-無(wú)論是分子、細(xì)胞功能還是細(xì)胞狀態(tài)
• 活細(xì)胞通常對(duì)于某些大的檢測(cè)分子是不可透過的，例如抗體
• 移動(dòng)的目標(biāo)會(huì)更難保持聚焦
• 使用的某些技術(shù)是否可能對(duì)活細(xì)胞有害
• 細(xì)胞必須保持其自然生理狀態(tài)

在各種實(shí)驗(yàn)操作、標(biāo)記檢測(cè)和成像觀察過程中一直保持細(xì)胞存活和健康并非易事。對(duì)于延時(shí)成像和細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間暴露于周圍環(huán)境條件下的實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)基的選擇尤為重要。若要獲得可靠的活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果，非常重要的一點(diǎn)是：細(xì)胞必須健康并保持存在盡可能接近生理溫度、pH、氧氣水平及其他條件的環(huán)境中。

第 3 步: 細(xì)胞標(biāo)記

應(yīng)選用合適的熒光染料（特異性靶向的熒光蛋白或小的膜通透性試劑）來(lái)檢測(cè)目標(biāo)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)或過程�？梢允褂闷渌麩晒馊玖弦黄鹜瑫r(shí)檢測(cè)多個(gè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和過程，但需要使用Fluorescence SpectraViewer（熒光光譜查看器）檢查激發(fā)光譜和發(fā)射光譜以確保不同熒光染料之間符合最小光譜重疊。切記盡量避免使用過多的熒光標(biāo)記，因?yàn)檫^多的熒光標(biāo)記會(huì)導(dǎo)致：

• 活細(xì)胞結(jié)構(gòu)標(biāo)記試劑——是為了幫助鑒定細(xì)胞成份
• 活細(xì)胞功能檢測(cè)試劑——是為了幫助識(shí)別細(xì)胞功能和過程

許多細(xì)胞比較敏感不能允許偏離它們的最佳溫度、摩爾滲透壓濃度、pH 和濕度。具體要求因您所關(guān)注的實(shí)驗(yàn)性問題而有所不同。例如，研究細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的實(shí)驗(yàn)與涉及受體激活和鈣積累的實(shí)驗(yàn)相比可能有不同的要求。一些強(qiáng)健的永生細(xì)胞系可以允許短時(shí)期的成像或監(jiān)測(cè)，而無(wú)需任何環(huán)境控制。相反，對(duì)于長(zhǎng)期成像和檢測(cè)研究，永生細(xì)胞和原代細(xì)胞的良好結(jié)果通常需要嚴(yán)格控制環(huán)境參數(shù)。

在加入了Invitrogen CellTracker Deep Red 染料的 HDFn 細(xì)胞培養(yǎng)物中的劃痕實(shí)驗(yàn)。（A）對(duì)照明區(qū)域進(jìn)行重復(fù)照明 10 小時(shí)。該區(qū)域中的細(xì)胞呈現(xiàn)出光毒性跡象（細(xì)胞活力喪失，因細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)到劃痕處）。（B）對(duì)比未照明區(qū)域中的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，有活力的細(xì)胞可以生長(zhǎng)至劃痕上。

上面的細(xì)胞顯示出由于過度曝光條件下導(dǎo)致的細(xì)胞膜災(zāi)難性起泡。起泡是用于描述由毒性引起的膜擾動(dòng)的術(shù)語(yǔ)。相比之下，下面這個(gè)細(xì)胞相對(duì)更健康，并且沒有顯示出異常形態(tài)。