細(xì)胞培養(yǎng)之細(xì)胞房的構(gòu)建及常用設(shè)備入門攻略
細(xì)胞培養(yǎng)是進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)研究時最基礎(chǔ)的實驗，是將離體的組織細(xì)胞置于模擬在體內(nèi)生存的環(huán)境中，讓其生長和發(fā)育的方法。現(xiàn)代生物技術(shù)（基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)等）的發(fā)展與細(xì)胞培養(yǎng)有著緊密聯(lián)系，然而細(xì)胞培養(yǎng)對無菌等條件的要求高于普通的微生物培養(yǎng)，實驗習(xí)慣和操作要求也有不同的標(biāo)準(zhǔn)，因此細(xì)胞房（細(xì)胞培養(yǎng)室）在建設(shè)時須要遵守一定的基本原則。
01細(xì)胞房的構(gòu)建
在細(xì)胞房內(nèi)進(jìn)行實驗時需嚴(yán)格保持無菌操作，以避免微生物及其他有害因素的影響。工作環(huán)境需保持清潔、干燥和無煙塵。一般細(xì)胞房有五個工作區(qū)：無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、清洗消毒滅菌區(qū)和儲藏區(qū)。
1、無菌操作區(qū)：無菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作，最好能與外界隔離，不能受到穿行或受其他干擾。一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。
2、孵育區(qū)：孵育區(qū)對無菌的要求雖沒有無菌區(qū)嚴(yán)格，但仍需保持清潔無塵。因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少且非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行。
3、制備區(qū)：主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體制備。
4、清洗和消毒滅菌區(qū)：應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
5、儲藏區(qū)：主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等設(shè)備。此環(huán)境同需要清潔無塵。
02細(xì)胞房常用設(shè)備
1、超凈工作臺：也稱為凈化工作臺。不同的品牌的超凈工作臺工作原理大致相同，通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，然后由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器精濾。由此送出的潔凈氣流以一定均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。一般使用的凈化工作臺主要有兩種：
3、超純水機(jī)：細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。細(xì)胞培養(yǎng)用水一般要求雙蒸水（0.8MΩ以上），純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。
4、單細(xì)胞懸液制備儀：可將組織制備成高活性單細(xì)胞懸液或組織勻漿。廣泛應(yīng)用在單細(xì)胞測序、原代細(xì)胞培養(yǎng)、流式分析、細(xì)胞分選、細(xì)胞治療等研究領(lǐng)域。
5、CO₂培養(yǎng)箱：CO₂培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)中必不可少的設(shè)備，它為細(xì)胞提供了一個體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境，如適宜的溫度、CO₂濃度和濕度等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時容易受到各種細(xì)菌、微生物的污染，因此，CO₂培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。RWD D180-P二氧化碳培養(yǎng)箱，具備高達(dá)140℃的高溫干熱滅菌系統(tǒng)成為大家首選設(shè)備。
6、干燥箱：培養(yǎng)箱的相關(guān)器械、器皿在日常清潔中需要消毒、烘干后使用，因此細(xì)胞實驗室必須配備干燥箱才行。常見的干燥箱是鼓風(fēng)式電熱干燥箱，其優(yōu)點在于溫度均勻、干燥效果較好。
7、冰箱：細(xì)胞實驗室中的冰箱分為普通冰箱/冷藏柜和低溫冰箱兩類。其中，低溫冰箱溫度控制跨度在-40℃~-150℃左右，常用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清以及一些動物樣品等。
8、液氮罐：為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或是細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃，因此，需要液氮罐對細(xì)胞進(jìn)行保藏。
9、恒溫水浴：從液氮或超低溫冰箱中取出細(xì)胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復(fù)蘇之后才傳代培養(yǎng)，因此，恒溫水浴是細(xì)胞實驗室必備儀器。
10、自動細(xì)胞計數(shù)儀：細(xì)胞計數(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究中的一項基本實驗技術(shù)，通過細(xì)胞計數(shù)儀可以精準(zhǔn)快速地計算細(xì)胞濃度、了解培養(yǎng)細(xì)胞狀態(tài)、繪制生長曲線等。
11、消毒器：直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。常用高壓蒸汽滅菌鍋，手提式高壓蒸汽消毒器。
12、器械：主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直）等。瑞沃德動物手術(shù)器械，質(zhì)量好助力工作效率提升。
ps：其他設(shè)備可參考具體實驗需求。
01細(xì)胞房的構(gòu)建
在細(xì)胞房內(nèi)進(jìn)行實驗時需嚴(yán)格保持無菌操作，以避免微生物及其他有害因素的影響。工作環(huán)境需保持清潔、干燥和無煙塵。一般細(xì)胞房有五個工作區(qū)：無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、清洗消毒滅菌區(qū)和儲藏區(qū)。
潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別表
1、無菌操作區(qū)：無菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作，最好能與外界隔離，不能受到穿行或受其他干擾。一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。
- 更衣間：提供更換實驗服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。
- 緩沖間：位于更衣間與操作間之間。 目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置細(xì)胞培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
- 無菌操作間：專用于無菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。
2、孵育區(qū)：孵育區(qū)對無菌的要求雖沒有無菌區(qū)嚴(yán)格，但仍需保持清潔無塵。因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少且非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行。
3、制備區(qū)：主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體制備。
4、清洗和消毒滅菌區(qū)：應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
5、儲藏區(qū)：主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等設(shè)備。此環(huán)境同需要清潔無塵。
02細(xì)胞房常用設(shè)備
1、超凈工作臺：也稱為凈化工作臺。不同的品牌的超凈工作臺工作原理大致相同，通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，然后由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器精濾。由此送出的潔凈氣流以一定均勻的斷面風(fēng)速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。一般使用的凈化工作臺主要有兩種：
- 側(cè)流式或稱垂直式
- 外流式或稱水平層流式。
3、超純水機(jī)：細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。細(xì)胞培養(yǎng)用水一般要求雙蒸水（0.8MΩ以上），純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。
4、單細(xì)胞懸液制備儀：可將組織制備成高活性單細(xì)胞懸液或組織勻漿。廣泛應(yīng)用在單細(xì)胞測序、原代細(xì)胞培養(yǎng)、流式分析、細(xì)胞分選、細(xì)胞治療等研究領(lǐng)域。
6、干燥箱：培養(yǎng)箱的相關(guān)器械、器皿在日常清潔中需要消毒、烘干后使用，因此細(xì)胞實驗室必須配備干燥箱才行。常見的干燥箱是鼓風(fēng)式電熱干燥箱，其優(yōu)點在于溫度均勻、干燥效果較好。
7、冰箱：細(xì)胞實驗室中的冰箱分為普通冰箱/冷藏柜和低溫冰箱兩類。其中，低溫冰箱溫度控制跨度在-40℃~-150℃左右，常用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清以及一些動物樣品等。
8、液氮罐：為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或是細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃，因此，需要液氮罐對細(xì)胞進(jìn)行保藏。
9、恒溫水浴：從液氮或超低溫冰箱中取出細(xì)胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復(fù)蘇之后才傳代培養(yǎng)，因此，恒溫水浴是細(xì)胞實驗室必備儀器。
10、自動細(xì)胞計數(shù)儀：細(xì)胞計數(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究中的一項基本實驗技術(shù)，通過細(xì)胞計數(shù)儀可以精準(zhǔn)快速地計算細(xì)胞濃度、了解培養(yǎng)細(xì)胞狀態(tài)、繪制生長曲線等。
12、器械：主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直）等。瑞沃德動物手術(shù)器械，質(zhì)量好助力工作效率提升。
ps：其他設(shè)備可參考具體實驗需求。
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