細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中溶劑選擇的注意事項(xiàng)
■ 不到不得已，誰也不想現(xiàn)用現(xiàn)配
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的工作濃度通常在 μM 級(jí)別，有的還是 nM 和 pM，要做到現(xiàn)用現(xiàn)配，難度系數(shù)有點(diǎn)高，好比讓一個(gè)日均不到 1000 步的人去爬 5000 米的山峰，這難度，你細(xì)品！一方面這個(gè)操作對(duì)天平的精度要求很高，誤差太大，再者，每一次稱量都會(huì)有損失，稱量的過程也難以做到無菌操作，當(dāng)然，對(duì)于一些極不穩(wěn)定的化合物，比如有極易氧化的特性的化合物，現(xiàn)用現(xiàn)配是剛需。
■ 不提比例就判定有毒，實(shí)在是不負(fù)責(zé)任的耍流氓行為
以 DMSO 為例，一般建議其終濃度在 0.1% 以下，這個(gè)濃度是非常保守的建議了，有一些細(xì)胞本身并不敏感，可以承受 0.5% 的 DMSO，甚至 1% 的 DMSO 對(duì)細(xì)胞活力也沒有明顯影響。不過呢，不管什么比例，記得要做好對(duì)照哦！
■ 凡事都有例外
正如前面所提到的，DMSO 固然可用于諸多化合物的溶解，但是面對(duì)含鉑化合物的時(shí)候，也是無能為力呢，這個(gè)時(shí)候，就需要 DMF 等輔助出場(chǎng)了。再比如辛伐他汀 (Simvastatin)，需要溶于乙醇、再用 NaOH 激活，才可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
■ 溶解藥物，既要講“法理”，也要通“人情”
比如，GW4869 微溶于 DMSO，難溶于水，除了借力甲磺酸，也可用 DMSO 配置成均勻的混懸液作為儲(chǔ)備液，最后用培養(yǎng)基稀釋可達(dá)到澄清狀態(tài)；比如，天氣冷的時(shí)候，可先預(yù)熱 DMSO 母液和培養(yǎng)基，這樣稀釋后減少析出的可能性；比如配置/稀釋的過程中，如遇到析出情況，可借助超聲/加熱的方式輔助溶清；比如購買了大量粉末，瓶子不夠大，無法配置到相應(yīng)濃度的時(shí)候，可分步溶解再轉(zhuǎn)移至大容器處理。
■ 不要隨便拒絕沒聽過的溶劑
THF、丙酮、乙腈、乙酸乙酯，這些溶劑不常見，卻是友好的存在，比如丙酮，在 MCF-7、RAW-264.7 以及 HUVEC 細(xì)胞系中，比 DMSO、乙醇和 DMF 都更加友好、毒性更小。再比如在 CV1-P 細(xì)胞系中，0.5% THF 對(duì)細(xì)胞活力也沒有明顯影響。
參考文獻(xiàn)
1. Shigeo Nagashima, Hiroaki Okamoto, et al. Hepatitis E virus egress depends on the exosomal pathway, with secretory exosomes derived from multivesicular bodies. J Gen Virol. 2014 Oct;95(Pt 10):2166-2175.
2. S Adler, S. Bremer, et al. The effects of solvents on embryonic stem cell differentiation. Toxicol In Vitro. 2006 Apr;20(3):265-71.
3. Leila Jamalzadeh, Hosein Ghafoori, et al. Cytotoxic Effects of Some Common Organic Solvents on MCF-7, RAW-264.7 and Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Avicenna J Med Biochem. 2016 June; 4(1):e33453.
4. Orly Livny, Betty Schwartz, et al. Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. J Nutr. 2002 Dec;132(12):3754-9.
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的工作濃度通常在 μM 級(jí)別，有的還是 nM 和 pM，要做到現(xiàn)用現(xiàn)配，難度系數(shù)有點(diǎn)高，好比讓一個(gè)日均不到 1000 步的人去爬 5000 米的山峰，這難度，你細(xì)品！一方面這個(gè)操作對(duì)天平的精度要求很高，誤差太大，再者，每一次稱量都會(huì)有損失，稱量的過程也難以做到無菌操作，當(dāng)然，對(duì)于一些極不穩(wěn)定的化合物，比如有極易氧化的特性的化合物，現(xiàn)用現(xiàn)配是剛需。
■ 不提比例就判定有毒，實(shí)在是不負(fù)責(zé)任的耍流氓行為
以 DMSO 為例，一般建議其終濃度在 0.1% 以下，這個(gè)濃度是非常保守的建議了，有一些細(xì)胞本身并不敏感，可以承受 0.5% 的 DMSO，甚至 1% 的 DMSO 對(duì)細(xì)胞活力也沒有明顯影響。不過呢，不管什么比例，記得要做好對(duì)照哦！
■ 凡事都有例外
正如前面所提到的，DMSO 固然可用于諸多化合物的溶解，但是面對(duì)含鉑化合物的時(shí)候，也是無能為力呢，這個(gè)時(shí)候，就需要 DMF 等輔助出場(chǎng)了。再比如辛伐他汀 (Simvastatin)，需要溶于乙醇、再用 NaOH 激活，才可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
■ 溶解藥物，既要講“法理”，也要通“人情”
比如，GW4869 微溶于 DMSO，難溶于水，除了借力甲磺酸，也可用 DMSO 配置成均勻的混懸液作為儲(chǔ)備液，最后用培養(yǎng)基稀釋可達(dá)到澄清狀態(tài)；比如，天氣冷的時(shí)候，可先預(yù)熱 DMSO 母液和培養(yǎng)基，這樣稀釋后減少析出的可能性；比如配置/稀釋的過程中，如遇到析出情況，可借助超聲/加熱的方式輔助溶清；比如購買了大量粉末，瓶子不夠大，無法配置到相應(yīng)濃度的時(shí)候，可分步溶解再轉(zhuǎn)移至大容器處理。
■ 不要隨便拒絕沒聽過的溶劑
THF、丙酮、乙腈、乙酸乙酯，這些溶劑不常見，卻是友好的存在，比如丙酮，在 MCF-7、RAW-264.7 以及 HUVEC 細(xì)胞系中，比 DMSO、乙醇和 DMF 都更加友好、毒性更小。再比如在 CV1-P 細(xì)胞系中，0.5% THF 對(duì)細(xì)胞活力也沒有明顯影響。
暴露于不同溶劑的 MCF-7、RAW-264.7 和 HUVEC 細(xì)胞的細(xì)胞存活率
參考文獻(xiàn)
1. Shigeo Nagashima, Hiroaki Okamoto, et al. Hepatitis E virus egress depends on the exosomal pathway, with secretory exosomes derived from multivesicular bodies. J Gen Virol. 2014 Oct;95(Pt 10):2166-2175.
2. S Adler, S. Bremer, et al. The effects of solvents on embryonic stem cell differentiation. Toxicol In Vitro. 2006 Apr;20(3):265-71.
3. Leila Jamalzadeh, Hosein Ghafoori, et al. Cytotoxic Effects of Some Common Organic Solvents on MCF-7, RAW-264.7 and Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Avicenna J Med Biochem. 2016 June; 4(1):e33453.
4. Orly Livny, Betty Schwartz, et al. Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. J Nutr. 2002 Dec;132(12):3754-9.
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