輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒使用說明

輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒​
一、產(chǎn)品簡介：
輔酶Q(CoenzymeQ，CoQ)是一種生物體內(nèi)廣泛存在的脂溶性醌類化合物，故又稱泛醌，在體內(nèi)呼吸鏈中質(zhì)子移位及電子傳遞中起重要作用，是呼吸鏈中重要的遞氫體，它是細胞呼吸和細胞代謝的激活劑，也是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強劑。對多種酶有激活作用。不同生物體來源的輔酶Q其側(cè)鏈異戊烯單位的數(shù)目不同，人類和哺乳動物是10個異戊烯單位，故稱輔酶Q₁₀。輔酶Q₁₀是輔酶Q類的重要成員之一，它們與線粒體內(nèi)膜相結(jié)合，廣泛參與體內(nèi)的生物代謝過程。輔酶Q₁₀不僅能給心臟提供動力，還具有卓越的抗氧化，清除自由基功能，能預防血管壁脂質(zhì)過氧化，預防動脈粥樣硬化，并且無任何毒副作用。具體作用體現(xiàn)在以下四個方面：
①幫助保護心臟輔酶Q₁₀有助于為心肌提供充足氧氣，預防突發(fā)性心臟病，尤其在心肌缺氧過程中輔酶Q₁₀發(fā)揮關(guān)鍵性改善作用。
②保護皮膚長期使用輔酶Q₁₀能夠有效防止皮膚衰老，減少臉部皺紋。
③抗疲勞輔酶Q₁₀使細胞保持良好健康的狀態(tài)，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。它是細胞自身產(chǎn)生的天然抗氧化劑和細胞代謝啟動劑，具有保護和恢復生物膜結(jié)構(gòu)的完整性、穩(wěn)定膜電位作用，是機體的非特異性免疫增強劑，因此顯示出極好抗疲勞作用。
④防癌抗癌研究表明，輔酶Q₁₀有抗腫瘤作用，臨床對于晚期轉(zhuǎn)移性癌癥有一定療效。
雅吉生物輔酶Q₁₀(CoQ₁₀)檢測試劑盒(比色法)其檢測原理是待測樣品在堿性條件下，EC取代了CoQ₁₀上的甲氰基，形成藍色化合物，通過分光光度計或酶標儀測定620nm處吸光度值，根據(jù)標準曲線即可測出輔酶Q₁₀的含量。本產(chǎn)品可用于測定花生、牛肉、沙丁魚、保健品等食品中的CoQ₁₀的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
 
二、產(chǎn)品組成：

名稱規(guī)格	50T	存儲
試劑(A):CoQ10標準(5mg/ml)	0.5ml	-20℃避光
試劑(B):EC solution	25ml	RT避光
試劑(C):EC buffer	100ml	RT
試劑(D):CoQ10 Assay buffer	25ml	RT
使用說明書	一份

 
三、自備材料：
1、無水乙醇
2、比色杯或96孔板
3、分光光度計或酶標儀

四、操作步驟(僅供參考)：
1、稀釋標準品：用EC buffer稀釋CoQ₁₀標準(5mg/ml)至0.5mg/ml，
-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 2、準備樣品：取新鮮動物心臟或肝臟等樣品，采用醇堿皂化法、溶劑皂化法等提取適量的CoQ₁₀提取液，-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 3、CoQ₁₀加樣：按照下表設置空白、標準和測定，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的CoQ₁₀濃度過高，可適當減少樣品用量或用EC buffer稀釋后再進行測定。
  
輔酶Q10(CoQ10)比色法試劑盒​

普通分光光度計(2ml比色杯)CoQ10測定
加入物(ml)	空白管	標準管	測定管
EC buffer	2	1.75	1.75
CoQ10標準(0.5mg/ml)	—	0.25	—
待測樣品(提取液)	—	—	0.25
EC solution	0.5	0.5	0.5
CoQ10 Assay buffer	0.5	0.5	0.5

酶標儀CoQ10測定
加入物(μl)	空白孔	標準孔	待測孔
EC buffer	200	175	175
CoQ10標準(0.5mg/ml)	-	25	-
待測樣品(提取液)	-	-	25
EC solution	50	50	50
CoQ10 Assay buffer	50	50	50

1. CoQ₁₀測定：混勻，室溫避光孵育3~5min，以空白管調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計或酶標儀600~640nm處測定標準管或測定管的吸光度。

計算：
液體樣品輔酶Q10濃度：CoQ10(mg/ml)=A_測定/A_標準×0.5
液體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg)=A_測定/A_標準×0.5×V_T
每100g固體樣品輔酶Q10含量：CoQ10(mg/g)=A_測定/A_標準×0.5×V_T×100/m
式中：A_測定=測定管的吸光度
A_標準=標準管的吸光度
0.5=CoQ₁₀標準的濃度(mg/ml)
V_T=CoQ₁₀提取液的總體積(ml)
m=樣品的實際用量(g)

注意事項：
1、待測樣品中不能含有CoQ₁₀抑制劑，同時需避免反復凍融。
2、在皂化過程中，震蕩不要劇烈，以免形成乳化層。
3、CoQ₁₀ Assay buffer 如果出現(xiàn)渾濁或絮狀物，應棄用。
4、CoQ₁₀標準梯度應準確，盡量減少不必要的誤差。
5、EC solution有一定毒性，請小心操作。
6、檢測標準品時，按步驟3表格混合后，2min內(nèi)即出現(xiàn)明顯的藍色變化并逐漸加深，20min后藍色開始變淺，30min 后逐漸呈黃綠色。620nm檢測數(shù)據(jù)表明，隨著時間的延長，OD值在不斷的下降，對應的顏色也已發(fā)生變化，特別是高濃度的標準品變化比較大。因此，應在出現(xiàn)最深的藍色結(jié)果且穩(wěn)定的時間段內(nèi)盡快檢測，而且建議每次同時檢測標準品(0.3~0.5mg/ml)和樣品。如有條件，最好用酶標儀檢測，減少因檢測時間導致的誤差。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 
有效期：6 個月有效。

附一：參考標準曲線范圍：
雅吉生物測定CoQ₁₀標準0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml在630nm 時吸光度，據(jù)此做出其

附二：CoQ10 的提取方法（來源于網(wǎng)絡，僅供參考）

方法一、醇堿皂化法
皂化液的制備 取豬心殘渣，壓干稱重，按干渣重加 300g/L 工業(yè)焦性沒食子酸，攪勻，加醇-堿溶液(干渣重 3~3.5 倍量乙醇、320g/L 氫氧化鈉)，加熱攪拌回流 25~30min，迅速冷卻至室溫，得皂化液。
 濃縮液的制備 取皂化液，立即加入其體積 1/10 量的石油醚或 120 號汽油提取 3~4 次，攪拌，分層，得提取液。水洗至近中性，在 40℃以下濃縮至原體積的 1/10，冷卻，-5℃以下靜置過夜，過濾，得濃縮液。
 
輔酶Q₁₀精制品的制備 將濃縮液過硅膠柱層析，先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得黃色油狀物。加熱無水乙醇溶解，過濾，濾液靜置，冷卻結(jié)晶，真空干燥，得輔酶Q₁₀ 精制品。

方法二、醇醚混合溶劑提取法
輔酶Q₁₀粗制品的制備 取豬心殘渣，加1.5倍量的V_乙醇：V_乙醚=3：1 混合溶劑，加熱提取3~4 次，每次15~20min，冷至室溫，過濾，合并提取液。濃縮，加適量水，加石油醚提取， 提取液濃縮，濃縮物為黃色油狀物，即輔酶Q₁₀粗制品。
  
輔酶Q₁₀成品的制備 取輔酶Q₁₀粗制品，加丙酮溶解，置-10℃以下析出雜質(zhì)，過濾，濾液蒸去丙酮，加少量石油醚溶解，過硅膠柱層析分離，加無水乙醇結(jié)晶，得輔酶 Q₁₀ 成品。