293T細胞培養(yǎng)常見問題解決方法
| 名稱 | 293T [HEK-293T] (人胚腎細胞) |
| 形態(tài) | 上皮樣 |
| 致瘤性 | + |
| 產(chǎn)物或抗原 | 大T抗原 |
| 生長特性 | 貼壁細胞 |
| 營養(yǎng)體系 | DMEM（C3113-0500）+10%FBS（C04001） |
來源：ATCC官網(wǎng)
293 [HEK-293]細胞是經(jīng)人腺病毒5（Ad5）轉(zhuǎn)染而形成的人胚腎細胞永生化細胞系，293細胞包含并表達轉(zhuǎn)染的Ad5基因。
293T細胞是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細胞，其極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。
293T細胞廣泛應(yīng)用于病毒包裝，用磷酸鈣轉(zhuǎn)染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內(nèi)及細胞外（分泌的或膜上）蛋白的便捷方式。
細 胞 特 性 .VivaCell
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貼壁性差
對貼壁因子很有要求，最好進行包被；也可以提高血清比例來嘗試觀察一下；注意板材的親水性，細胞貼壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶過度消化。
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增殖迅速
細胞增殖非�？欤ǔ１对鰰r間不到一天，隔天即可長滿，融合率不可過高，需要及時傳代。
培 養(yǎng) 難 點 .VivaCell
細 胞 聚 團 嚴(yán) 重
1. 為啥293T細胞傳代后聚團嚴(yán)重？
經(jīng)傳代后嚴(yán)重聚團的293T細胞
圖片來源于客戶僅供參考
原因推斷：胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細胞聚團。
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消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細胞受傷嚴(yán)重，破損的細胞碎片容易粘連聚團。
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消化時細胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團。
解決辦法：鑒于該細胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時間控制15s-30s；吹打動作輕柔，控制在10-20次；細胞融合率達到80%傳代即可傳代，不可長的太滿。
2. 為啥293T換了血清批次后聚團嚴(yán)重？
換血清批次后嚴(yán)重聚團的293T細胞
圖片來源于客戶僅供參考
原因推斷：血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。293T細胞本身有聚團生長特性，但嚴(yán)重聚團可能受到血清里的某些因子刺激。
解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）。
貼 壁 性 差
1. 為什么用了新批號的血清，293T細胞貼壁性變差？
貼壁疏松的293T細胞
圖片來源于客戶僅供參考
原因推斷：血清存在批間差異，而293T細胞本身特點就是貼壁性差，對不同批次的血清適應(yīng)性不同，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象。
解決辦法：可適當(dāng)加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個血清批次多囤一些，可以避免血清批間差對細胞的影響。
2. 為啥293T細胞從瓶里（例如T25）鋪板到孔里（96孔板），貼壁性變差？
原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外，293T細胞貼壁性變差極有可能是因為空間的隔離導(dǎo)致細胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號分子濃度太低，不利于細胞的貼壁或增殖。
解決辦法：在鋪板前，對孔板進行明膠（BI：01-944）包被，可有效促進細胞貼壁。
轉(zhuǎn) 染 病 毒 后 細 胞 凋 亡 嚴(yán) 重
1. 為啥293T細胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴(yán)重？
經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細胞
圖片來源于客戶僅供參考
原因推斷：在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響。很多同學(xué)說前期培養(yǎng)細胞形態(tài)正常呀，其實細胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細胞是否健康的一個外在指標(biāo)，還要結(jié)合細胞其它指標(biāo)對細胞健康進行評定（比如倍增時間，存活率）。
解決辦法：通過更換血清批次，再進行轉(zhuǎn)染實驗并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。
評 論 征 集 .VivaCell
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