乳酸含量（lactic acid，LA）試劑盒使用說明書

 
注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。
 
測定原理：
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，H⁺傳遞給PMS生成的PMSH₂還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。
 
自備實驗用品及儀器：
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
 
試劑組成和配制：
提取液：液體55mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體12mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入1.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加15mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。
標準品：液體1mL×1支，4℃保存。
顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有5個棕色空瓶）
 
樣本處理：

• 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。
• 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測定。
• 血清：直接測定。              

 
測定操作：

樣品對照管	樣品測定管	標準對照管	標準測定管
50	50
		50	50
300	450	300	450
150		150
200	200	200	200
300	300	300	300

注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設(shè)一個樣品對照管

計算公式：
1. 按照蛋白含量計算
LA含量（μmol/mg prot）=△A樣÷△A標×C標÷ Cpr=2×△A樣÷△A標÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
LA含量（μmol/g 鮮重）=△A樣÷△A標×C標÷ W=2×△A樣÷△A標÷ W

• 按照細胞數(shù)量計算

LA含量（μmol/10⁴ cell）=△A樣÷△A標×C標÷ 細胞數(shù)量=2×△A樣÷△A標÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
LA含量（μmol/mL）=△A樣÷△A標×C標=2×△A樣÷△A標
C標：標準品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

注意事項

• 若吸光值超過2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
• 最低檢出限為1.8μmol/L。