Echo Revolve顯微鏡在香棒蟲草生藥學(xué)與數(shù)字化表征研究的應(yīng)用

前言

香棒蟲草主產(chǎn)于山西省，主要分布在山西南部中條山一帶，民間常用它代替冬蟲夏草作為滋補(bǔ)品使用。除了山西，香棒蟲草在我國(guó)甘肅、云南、青海、廣東、海南及國(guó)外斯里蘭卡和歐洲也有分布。雖山西民間將香棒蟲草作為冬蟲夏草的替代品，但其未收載進(jìn)藥材標(biāo)準(zhǔn)，且藥用歷史較短�！吨袊�(guó)真菌志》雖明確了其真菌的來源，但對(duì)其宿主來源和形態(tài)均未有詳細(xì)的描述。鑒于此，本研究應(yīng)用性狀及顯微鑒定法，對(duì)香棒蟲草的蟲體形態(tài)、頭部特征、子座長(zhǎng)出方式、環(huán)紋及分節(jié)、復(fù)毛區(qū)剛毛等特征進(jìn)行詳細(xì)研究和科學(xué)描述，同時(shí)與冬蟲夏草進(jìn)行比較，有助于香棒蟲草資源的開發(fā)及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，同時(shí)可以為冬蟲夏草的市場(chǎng)監(jiān)管和監(jiān)督檢驗(yàn)提供參考依據(jù)。

本研究應(yīng)用數(shù)碼相機(jī)、體式顯微鏡與其數(shù)碼成像系統(tǒng)對(duì)香棒蟲草子座和蟲體的外觀性狀特征進(jìn)行觀察和表征；通過冷凍切片和熒光染色，體式熒光顯微鏡與其數(shù)碼成像系統(tǒng)、熒光顯微鏡工作站，對(duì)香棒蟲草子座和蟲體部位的橫切面顯微特征進(jìn)行觀察和表征；應(yīng)用掃描電鏡對(duì)表面及剖面的特征進(jìn)行探究，并與冬蟲夏草進(jìn)行了生藥學(xué)鑒別特征比較。

作者采用calcofluor white stain試液染色后，在Echo Revolve熒光顯微鏡 DAPI、FITC和RFP 3個(gè)通道下分別觀察繼發(fā)性熒光及自發(fā)性熒光，將3個(gè)通道的圖像疊加，可見蟲體內(nèi)部菌絲層與表皮分別呈紫紅及黃色，動(dòng)物組織與菌絲組織熒光差異明顯，見圖1。

▲ 圖1 香棒蟲草蟲體的橫切面（標(biāo)尺為該圖片比例）

A-calcofluor white stain染色，3通道疊加（A1-dapi通道；A2-fitc通道；A3-rfp通道）；B－直接制片，白光下觀察；C－乳酸酚棉藍(lán)染色，白光下觀察；D－calcofluor white stain染色，熒光下觀察
 

本研究系統(tǒng)闡明了香棒蟲草頭部上顎、胸足、腹節(jié)環(huán)節(jié)、尾部剛毛及體壁針狀毛等性狀特征，子座部位不同菌絲層熒光顯微特征及蟲體部位中蟲體組織和菌絲組織熒光顯微特征差異。香棒蟲草與冬蟲夏草相比，在蟲體形態(tài)、腹足有無(wú)、氣孔形態(tài)、子座長(zhǎng)出部位等性狀特征，以及體壁被毛、剛毛、毛片等顯微特征中存在明顯差異。通過對(duì)香棒蟲草進(jìn)行生藥學(xué)研究，可為香棒蟲草資源的開發(fā)與利用提供參考；通過與冬蟲夏草的對(duì)比研究，可以避免混淆用藥，為市場(chǎng)監(jiān)管提供科學(xué)依據(jù)，也為蟲草類藥用品種數(shù)字化表征規(guī)范的建立奠定基礎(chǔ)。

  研究亮點(diǎn)：  

▶  首次采用calcoflouor white stain乳液進(jìn)行熒光染色，子座與蟲體及其不同組織間區(qū)別明顯，證明該方法可對(duì)蟲草類藥材不同組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行區(qū)分和表征。

▶ 闡明了香棒蟲草與冬蟲夏草的區(qū)別性特征，可以通過性狀和顯微特征來區(qū)分冬蟲夏草與香棒蟲草，以防混用及摻偽的情況，也可為粉末和制劑的檢驗(yàn)提供參考，同時(shí)也為其他混淆品的鑒別研究提供依據(jù)。

文獻(xiàn)原文：doi:10.11669/cpj.2022.06.006

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