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不同類型細(xì)胞傳代方法簡介

瀏覽次數(shù):1708 發(fā)布日期:2022-6-17  來源:尚恩生物

根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的培養(yǎng)細(xì)胞傳代方法。懸浮生長的細(xì)胞可以用直接吹打或離心分離后傳代,或自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代,部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打即可傳代。

 

細(xì)胞傳代培養(yǎng)時常用的酶為胰蛋白酶,它可以破壞細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與培養(yǎng)瓶之間的細(xì)胞連接或接觸,從而使它們之間的連接減弱或完全消失。經(jīng)胰蛋白酶處理后的貼壁細(xì)胞在外力(如吹打)的作用下可以分散成單個細(xì)胞,再經(jīng)稀釋和接種后就可以為細(xì)胞生長提供足夠的營養(yǎng)和空間,達(dá)到細(xì)胞傳代培養(yǎng)的目的。
 

01
貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1)吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2)向瓶內(nèi)加入3-5ml PBS,輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使PBS流過所有細(xì)胞表面,然后吸掉或倒掉PBS后再加1~2 mL新的消化液進(jìn)行消化。
3)最好在37℃或25 ℃以上室溫環(huán)境下進(jìn)行消化。消化2~5 min后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后,應(yīng)立即終止消化。
4)加完全培養(yǎng)基3-5ml,終止消化。
5)用彎頭吸管,吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,吹打過程要順序進(jìn)行,從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束,以確保所有底部都被吹到。吹打時動作要輕柔不要用力過猛,同時盡可能不要出現(xiàn)泡沫,這些都會對細(xì)胞有損傷。細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。
6)計數(shù),分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

02
懸浮細(xì)胞的傳代
因懸浮生長細(xì)胞不貼壁,故傳代時不必采用酶消化方法,而可直接傳代或離心收集細(xì)胞后傳代。直接傳代即讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,再傳代。懸浮細(xì)胞常采用離心方法傳代,即將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),800~1 000 r/min離心5 min,去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打形成細(xì)胞懸液,然后傳代接種。


03

半懸浮細(xì)胞的傳代

半懸浮細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象,可不經(jīng)消化處理直接吹打使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來,而進(jìn)行傳代。但這種方法僅限于部分貼壁不牢的細(xì)胞,如SP2/0細(xì)胞等。直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,細(xì)胞也常有大量丟失,因而絕大部分貼壁生長的細(xì)胞均需消化后,才能吹打傳代。


圖片
來源:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司
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