使用生物方法消除凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾因素

由于鱟試劑凝集系統(tǒng)中存在著G因子反應(yīng)旁路，可以被β-葡聚糖激活產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的“假陽(yáng)性”，通常采用生物方法消除于擾。

USP、EP及JP在最新修訂的統(tǒng)一的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中就對(duì)鱟試劑的使用作了注釋?zhuān)撼齼?nèi)毒素外，鱟試劑也與某些β-葡聚糖反應(yīng)。一些經(jīng)過(guò)處理而制備的鱟試劑不與β-葡聚糖反應(yīng)，含有β-葡聚糖的樣品必須使用特異性鱟試劑檢查。
 

不同的特異性鱟試劑有不同的特點(diǎn)。無(wú)G因子鱟試劑是將普通鱟試劑中存在的G因子，以親和層析方法分離去除，即使被測(cè)樣品中存在真菌多糖（非內(nèi)毒素），也不能產(chǎn)生活化的G因子，旁路反應(yīng)被阻斷，使成為對(duì)內(nèi)毒素具有特異性。另一種特異性鱟試劑是采用一種特殊試劑，只除去抗LPS因子，而保留抗G因子，以達(dá)到即增加了對(duì)內(nèi)毒素的敏感性，又削弱了真菌多糖活性G因子的能力。

此外，1990年Tsuchiya M報(bào)道[1]，由于真菌多糖與普通鱟試劑反應(yīng)形成凝膠，有一個(gè)特定濃度范圍（10-3~ 10-6 mg/ml），大于或小于這個(gè)濃度都不能成膠，故在制備普通鱟試劑的基礎(chǔ)上，加入過(guò)量的真菌多糖1mg/ml），可阻止G因子的活化，即“封閉”了旁路，達(dá)到制備特異鱟試劑的目的。復(fù)方丹參注射液、清開(kāi)靈注射液﹑參麥注射液則是通過(guò)加入(1-3)-β-D葡聚糖來(lái)消除干擾的[2]。

為了避免β-葡聚糖的干擾，葉良君建議在日常工作中，應(yīng)盡量用特異性鱟試劑代替普通鱟試劑進(jìn)行含糖大輸液及其他大輸液細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查，如果使用的是普通鱟試劑，應(yīng)該在排除干擾的情況下結(jié)論；同時(shí)，應(yīng)該完善藥典中葡萄糖原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，β-葡聚糖的含量控制應(yīng)納入檢測(cè)范圍，在生產(chǎn)中最好使用定點(diǎn)廠家的合格葡萄糖原料。

應(yīng)當(dāng)注意，由于不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑其特異性也不同，有時(shí)甚至相差很遠(yuǎn)，因此一旦出現(xiàn)內(nèi)毒素陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)在排除葡聚糖干擾后再慎下結(jié)論以免誤判。

參考文獻(xiàn)：
[1] Tsuehiya M．Development of all endotoxin·speetle limuhs ameboeyte lysate test bloekingβ-glUCan-mediated pathway by earboxymethylated curdlsn and its appli- cation[J]．Jpn J Baaed，1990，45(6)：903-906

[2] 陳吉生，楊澤民.5種中草藥注射劑細(xì)菌內(nèi)毒紊檢查方法的研究[J]．中國(guó) 藥房，2001，12(5)：311-314