親和層析法和凝膠過濾層析法對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化的原理

蛋白純化介質(zhì)主要應(yīng)用于研究目的蛋白的結(jié)構(gòu)、功用以及相互作用的和過程中。比如：在蛋白純化過程中，由于親和層析法的選擇性和結(jié)合力較強(qiáng)，分辨率也高，所以，親和層析法是一種常用的蛋白、抗體純化方法。
親和層析法的原理
親和層析法是利用生物大分子與一些相應(yīng)的特定分子之間的特異性識別和可逆結(jié)合的特點(diǎn)，分離生物大分子的一種方法。親和層析是一種行之有效的蛋白質(zhì)純化方法，通�？梢酝ㄟ^一步處理就能獲得高純度的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可以根據(jù)它們對特定配體的特異性而不是它們共價結(jié)合的能力來分離。

凝膠過濾層析法又稱分子篩層析法，它是通過凝膠介質(zhì)過濾的作用進(jìn)行蛋白質(zhì)分離和純化，當(dāng)樣本流經(jīng)葡聚糖凝膠介質(zhì)或瓊脂糖凝膠填料時，會根據(jù)樣品的大小和形狀對流經(jīng)的蛋白進(jìn)行分離，從而獲得具有一定純度的目的蛋白進(jìn)行下游應(yīng)用。

葡聚糖凝膠
交聯(lián)葡聚糖凝膠是葡聚糖通過環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)而成的球形凝膠。交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷的兩個基團(tuán)分別與兩個葡聚糖殘基上的游離羥基反應(yīng)，使葡聚糖分子在分子內(nèi)或分子間發(fā)生交聯(lián)，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的微球。葡聚糖是水溶性的，與葡聚糖凝膠交聯(lián)，不溶于水，具有一定的抗壓強(qiáng)度�？芍苯佑糜谀�膠色譜。合成交聯(lián)葡聚糖時，凝膠的交聯(lián)度和目數(shù)由糖的濃度和交聯(lián)劑的用量和反應(yīng)條件決定，所以填料的抗壓強(qiáng)度和排阻能力也是限定的。

小葡聚糖凝膠（G-10、G-15、G-25、G-50）主要用于脫鹽、多肽等小分子的分離。一般分子量在100萬以上的大分子不能用葡聚糖凝膠，用瓊脂糖凝膠，凝膠型號G后面的數(shù)字大致表示10g型凝膠有吸水值（ML）。

葡聚糖凝膠過濾介質(zhì)主要有以下幾種：
Smartdex G-10
Smartdex G-15
Smartdex G-25
PreCap Desalting
Prepacked Desalting Column
SpinDesalt Column
Smartdex G-50
Smartdex G-75
Smartdex G-100
Smartdex LH-20

瓊脂糖凝膠
瓊脂糖是從海洋紅藻中提取的天然高分子化合物，β-D-半乳糖與3,6-脫水-L-半乳糖交替連接。β- D-半乳糖和3,6-脫水-l-半乳糖之間的β(1→4)糖苷鍵，而3,6-脫水-L-半乳糖和β-D-半乳糖之間的α(1→3)糖苷鍵鍵連接。瓊脂糖在室溫下是固體。加熱到45度以上時溶于水。當(dāng)熱的瓊脂糖溶液（糖濃度為2%～16%）冷卻后，鏈狀分子之間形成雙螺旋，進(jìn)一步自發(fā)聚集成束狀結(jié)構(gòu)，形成多孔的三維網(wǎng)絡(luò)瓊脂糖凝膠。

凝膠的平均孔徑隨糖溶液的濃度而變化，糖濃度大，凝膠的平均孔徑小。高流量瓊脂糖凝膠可承受高達(dá)0.3～0.4MPa的壓力，基本滿足大規(guī)模蛋白純化分離的需要。

瓊脂糖凝膠過濾介質(zhì)主要包含以下幾種：
Smartarose 4B
Smartarose 6B
Smartarose CL-4B
Smartarose CL-6B
Smartarose 4FF
Smartarose 6FF
Smac Beads

蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質(zhì)、葡聚糖凝膠介質(zhì)等蛋白純化和分離填料以及相關(guān)生物試劑。另外還提供、組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)、GST-tag蛋白親和純化介質(zhì)、 MBP-tag蛋白親和純化介質(zhì)、生物素Biotin-tag蛋白親和純化介質(zhì)、Strep-tagll標(biāo)簽親和純化介質(zhì)、 標(biāo)簽抗體親和純化介質(zhì)等標(biāo)簽蛋白親和層析介質(zhì)；離子交換層析介質(zhì)、疏水層析介質(zhì)、 磁性微球等。