肺癌分型分期的介紹及多種可用于肺癌研究的小鼠模型

肺癌是我國(guó)腫瘤發(fā)病率和死亡率最高的癌種。
國(guó)家癌癥中心2022年發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示：2016年，我國(guó)新發(fā)肺癌病例約占所有新發(fā)癌癥病例的20.4%（82.8萬(wàn)例），肺癌死亡病例約占所有癌癥死亡病例的27.2%（65.7萬(wàn)例），位居所有癌癥死亡的第1位。（注：國(guó)家的癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)通常會(huì)延遲3-5年）
 

圖1. 最新中國(guó)癌癥發(fā)病及死亡情況^[1]

在第22個(gè)國(guó)際肺癌日到來(lái)之際，小編將帶大家了解下肺的結(jié)構(gòu)和功能、肺癌的分型與分期、肺癌的藥物治療以及肺癌研究的小鼠模型。

1 肺的結(jié)構(gòu)與功能

 

圖2. 呼吸系統(tǒng)示意圖^[3]

正常的肺呈淺紅色，位于胸腔內(nèi)，覆蓋在心臟之上。

人有兩個(gè)肺，左右各一。右肺較寬短，分為上、中、下三個(gè)葉，而左肺較狹長(zhǎng)，僅有上、下兩葉，因此人體一共有五葉。

每次呼吸，空氣通過(guò)鼻腔進(jìn)入氣管，隨后進(jìn)入肺。在喉頭邊緣，氣管分為左右兩個(gè)支氣管，支氣管逐漸分支成更小的細(xì)支氣管，細(xì)支氣管在肺部分支形成小肺泡簇。肺泡是肺的功能單位，它們形成氣體交換的場(chǎng)所。

肺是呼吸系統(tǒng)的重要器官，它的主要功能是氣體交換，當(dāng)你吸氣時(shí)，空氣進(jìn)入你的肺，氧氣從空氣中進(jìn)入你的血液。與此同時(shí)，二氧化碳從你的血液移動(dòng)到肺部，被呼出。

此外，肺還有防御、代謝、貯血等功能。肺的防御功能主要是對(duì)吸入氣體中的病原微生物和其他塵粒進(jìn)行清除保持氣管、支氣管到終末呼吸單位處于無(wú)菌狀態(tài)。

肺組織一旦發(fā)生癌變就會(huì)嚴(yán)重影響其功能，而肺癌就是嚴(yán)重的肺部癌變。不同類(lèi)型的肺癌在治療上也有不盡相同，下面我們就來(lái)淺談一下肺癌的分型與分期。

2 肺癌的分型與分期
2.1肺癌的分型
肺癌主要分為非小細(xì)胞肺癌（non small cell lung cancer, NSCLC）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC），其中非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總診斷率的85%。

非小細(xì)胞肺癌還可以進(jìn)一步劃分為腺癌、鱗癌和大細(xì)胞癌等，其中腺癌是肺癌最常見(jiàn)的亞型，其次是鱗狀細(xì)胞癌。

在非小細(xì)胞肺癌中，常見(jiàn)的驅(qū)動(dòng)突變包括Kras突變、EGFR突變、FGFR1擴(kuò)增、ALK重排、HER2突變、MET擴(kuò)增、BRAF突變等。

而在小細(xì)胞肺癌中，最常出現(xiàn)的驅(qū)動(dòng)突變是Rb和p53的基因功能缺失。
 

圖3. 肺癌組織學(xué)^[4]

2.2肺癌的分期
肺癌分期對(duì)于診斷時(shí)確定疾病的進(jìn)展和擴(kuò)散程度至關(guān)重要，是臨床醫(yī)生對(duì)患者實(shí)施治療和判斷預(yù)后的指南。

TNM分期系統(tǒng)是目前國(guó)際上最為通用的腫瘤分期系統(tǒng)，也是臨床上進(jìn)行惡性腫瘤分期的標(biāo)準(zhǔn)方法。

在肺癌TNM分期中：
T表示肺癌原發(fā)腫瘤情況，如腫瘤的位置、大小等；
N代表肺癌局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況；
M代表肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，癌癥一旦發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，意味著患者已經(jīng)處于IV期（晚期）階段。

在確定患者的TNM分期值后，將這些信息組合就可得到病人總的分期，小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌在專(zhuān)業(yè)的分期系統(tǒng)稍有不同，為了便于交流最終都可以被表示為0期、I期、II期、III期或者IV期。其中，I，II，III期會(huì)進(jìn)一步細(xì)分為A或B，如IIIA，IIIB期等。

我們常聽(tīng)到的早期、中期和晚期分別對(duì)應(yīng)的是I期、II/III期和IV期。
 

3 肺癌的藥物治療

 

肺癌的藥物治療包括化療、分子靶向治療以及免疫治療。

化療分為新輔助化療、輔助化療、姑息化療，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格掌握臨床適應(yīng)證，并在腫瘤內(nèi)科醫(yī)師的指導(dǎo)下施行。

分子靶向治療需要明確基因突變狀態(tài)，依據(jù)分子分型指導(dǎo)靶向治療。高達(dá)69%的晚期NSCLC患者可能具有潛在的可操作分子靶點(diǎn)。

肺癌的發(fā)生和進(jìn)展不僅依賴(lài)于癌細(xì)胞進(jìn)化的基因組學(xué)和分子特性，還依賴(lài)于它們與腫瘤環(huán)境的相互作用，特別是與免疫系統(tǒng)的相互作用。

近年，以免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如PD-1單抗或PD-L1單抗等）為代表的免疫治療已被證實(shí)可改善肺癌患者的生存率。目前多個(gè) PD-1單抗和（或）PD-L1單抗已獲批上市并應(yīng)用于晚期及局部晚期NSCLC和SCLC的治療，更多的臨床適應(yīng)證尚在不斷探索中。

抗癌藥物的發(fā)現(xiàn)和臨床前試驗(yàn)都離不開(kāi)動(dòng)物模型的驗(yàn)證，用于肺癌研究的動(dòng)物模型為探索肺癌發(fā)生與轉(zhuǎn)移的機(jī)制、篩選和評(píng)價(jià)抗癌藥物的藥效提供了有力的工具。目前可用于肺癌研究的小鼠模型有哪些呢？一起接著往下看吧！

4 肺癌研究的小鼠模型
基于肺癌的分型，我們將從非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞癌這兩個(gè)方面，為大家介紹目前可用于肺癌研究的小鼠模型。

4.1非小細(xì)胞癌研究模型
4.1.1  Kras突變肺癌模型
野生型Kras激活/失活效應(yīng)是受控的，而突變型Kras蛋白功能異常，持續(xù)處于激活狀態(tài)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖。Kras突變的腫瘤細(xì)胞比其他腫瘤細(xì)胞更容易存活，因此Kras突變的肺癌治療也一直是醫(yī)學(xué)界的一個(gè)難題。

目前國(guó)際上應(yīng)用最廣泛的肺癌動(dòng)物模型就是Kras-LSL-G12D小鼠模型，可以通過(guò)與肺上皮細(xì)胞特異性的Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交來(lái)實(shí)現(xiàn)Kras突變體的激活，從而導(dǎo)致肺癌的發(fā)生。有研究表明，通過(guò)SPC-Cre小鼠與Kras-LSL-G12D小鼠雜交，從而獲得了從肺部炎性反應(yīng)到肺腺瘤進(jìn)展時(shí)程較長(zhǎng)的慢性自發(fā)肺部腫瘤小鼠模型。

Kras-G12D誘導(dǎo)的肺癌模型為肺癌病因的研究提供了更長(zhǎng)的窗口期，也為Kras突變的肺癌治療提供了更有力的研究工具。

Kras-LSL-G12D還經(jīng)常和其它癌癥驅(qū)動(dòng)基因聯(lián)用，用來(lái)滿(mǎn)足更多的肺癌研究需求。

在人類(lèi)NSCLC中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)Kras-G12D突變和Lkb1缺失同時(shí)出現(xiàn)，而小鼠中Kras- G12D突變伴隨Lkb1缺失會(huì)加速肺腫瘤發(fā)展，惡性程度也會(huì)更高，出現(xiàn)多樣的表型特征，包括鱗狀細(xì)胞癌和大細(xì)胞癌。

Kras-G12D突變并發(fā)激活Wnt /β-Catenin信號(hào)會(huì)增加侵襲性和遠(yuǎn)端組織感染。Kras-G12D突變伴隨p53失活導(dǎo)致侵襲性增加，也發(fā)生轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，這可能是p53的缺失導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定，從而導(dǎo)致腫瘤惡性化。
 

4.1.2 EGFR突變肺癌模型
表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)在細(xì)胞增殖和分化中起到重要作用，是目前最重要的靶向治療靶點(diǎn)之一。突變后導(dǎo)致蛋白功能異常，持續(xù)處于激活狀態(tài)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖。

針對(duì)其敏感突變的EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKI），是治療NSCLC最常用的靶向藥物，EGFR-TKI療效好和副作用少，為很多肺癌患者帶來(lái)希望，是肺癌治療中的突破性進(jìn)展。

但是靶向治療也有其自身的弊端，幾乎所有的EGFR-TKI治療患者最終均產(chǎn)生獲得性耐藥：第一代和第二代靶向藥治療后出現(xiàn)T790M耐藥性突變，第三代靶向藥治療后出現(xiàn)C797S耐藥性突變。由此催生了多種攜帶耐藥性突變的EGFR肺癌模型，可用于新藥的研發(fā)和腫瘤耐藥性的研究。

和Kras-G12D突變引起的局灶性腫瘤不同，EGFR-L858R突變引起的是類(lèi)似于支氣管肺泡的彌漫性腫瘤，EGFR外顯子19的缺失引起多灶性腺癌。研究發(fā)現(xiàn)，EGFR-T790M突變小鼠以及EGFR-L858R+T790M突變小鼠比EGFR-L858R突變小鼠的腫瘤潛伏期要更長(zhǎng)，適用于耐藥性機(jī)制研究。
 

4.1.3 ALK基因重排肺癌模型
ALK編碼酪氨酸受體，在正常肺中不表達(dá)，但是在約5％的非小細(xì)胞肺癌患者中會(huì)表達(dá)EML4-ALK，EML4-ALK是由于染色體倒位形成EML4基因與ALK 基因的重排，EML4-ALK的表達(dá)促使肺癌發(fā)生和惡化，是目前靶向治療的熱門(mén)靶點(diǎn)之一。

EML4-ALK融合常見(jiàn)于年輕患者以及輕度吸煙或不吸煙者，并且EML4-ALK與Kras以及EGFR突變相互排斥，基本不同時(shí)出現(xiàn)。

研究表明，肺特異性表達(dá)EML4-ALK的小鼠出生后不久發(fā)生多發(fā)性肺腺癌，為研究ALK靶向抑制劑（ALK-TKI）的敏感性以及耐藥性提供合適模型，并且也為ALK-TKI的臨床前藥物篩選提供有力工具。
 

4.1.4其他肺癌模型
除了以上3類(lèi)小鼠模型，還有其他基于驅(qū)動(dòng)突變導(dǎo)致的肺癌研究模型，如PIK3CA-H1047R突變小鼠可發(fā)生具有支氣管肺泡特征的腺癌，Braf-V600E突變小鼠可發(fā)生腺瘤（很少進(jìn)展為腺癌）。

4.2 小細(xì)胞癌研究模型
小細(xì)胞肺癌是一種侵襲性強(qiáng)、難以治療的癌癥類(lèi)型，約占全部肺癌病例的13-15%。具有轉(zhuǎn)移速度快、惡性程度高、預(yù)后情況差等特征，屬于惡性程度極高內(nèi)分泌腫瘤。

在小細(xì)胞肺癌中，最常出現(xiàn)的驅(qū)動(dòng)突變是Rb和p53的基因功能缺失，因此SCLC動(dòng)物模型中通常使用Rb flox小鼠，p53 flox小鼠和肺部特異性Cre小鼠進(jìn)行交配獲得。

Rb和p53的同時(shí)特異性敲除后，SCLC的腫瘤發(fā)生率很高，并且腫瘤和人類(lèi)腫瘤相似度很高，也能轉(zhuǎn)移到特定的組織，但是整個(gè)周期比較長(zhǎng)，大約9個(gè)月。

因此通常會(huì)加入一些其他突變基因加速腫瘤發(fā)生，例如Rb，p53和Pten同時(shí)的組織敲除，Rb，p53和p130同時(shí)敲除，Rb和p53敲除同時(shí)過(guò)表Lmyc和Nfib[1]，均可加速腫瘤發(fā)生。

基于現(xiàn)有的研究，南模生物自主構(gòu)建了一系列攜帶經(jīng)典肺癌驅(qū)動(dòng)突變的基因工程小鼠模型，為肺癌發(fā)生機(jī)制研究、肺癌藥物藥物篩選以及相關(guān)藥效實(shí)驗(yàn)提供了強(qiáng)有力的工具。具體信息見(jiàn)下表：
 

部分驗(yàn)證數(shù)據(jù)如下：
Kras-LSL-G12D小鼠模型

1 肺部CT檢測(cè)腫瘤的形成

2 腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)

圖9. 荷瘤小鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞體積隨時(shí)間增長(zhǎng)的變化

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