HK-2細胞培養(yǎng)技巧

人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK-2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過轉入HPV-16 E6/E7基因構建而成，并在無血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長了一年多。HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。

陽性表達：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細胞角蛋白;α3β1 整合素；纖連蛋白。

陰性表達：因子VIII 相關抗原、6.19 抗原和 CALLA 內(nèi)肽酶呈陰性。

在培養(yǎng)HK-2細胞的時候，常會出現(xiàn)一些細節(jié)問題，不可掉以輕心。以下是小海星為大家準備培養(yǎng)HK-2細胞常見的問題，以及解決方案。
1. 出現(xiàn)拉絲
細胞伸出細長的絲有兩種情況：
第一種情況是細胞遷移造成的，細胞在培養(yǎng)皿上并不是靜態(tài)的，也會出現(xiàn)遷移。遷移時細胞的一部分滯留在原處，遷移的過程中會拉出一條細長的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數(shù)，細胞整體的生長狀態(tài)是正常的，不用特殊處理。

第二種情況是營養(yǎng)不良，拉絲的細胞占大多數(shù)，同時細胞生長緩慢，此時可以提高血清比例（不超過20%）或添加5 ng/mL EGF。
2. 形態(tài)不對
正常的HK-2呈鋪路石狀生長，如果細胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀（如下圖），可能是因為培養(yǎng)環(huán)境發(fā)生了較大的改變，比如從有血清到無血清的轉換，此時換回原來的培養(yǎng)條件細胞可逐漸恢復；如果細胞變得細長，這時候可能是營養(yǎng)不良。
3. 出現(xiàn)空泡
空泡問題需要結合生長速度和形態(tài)來看：如果生長速度和形態(tài)正常，空泡可能是正常的細胞活動，傳代后空泡即可減輕。

如果生長較慢，形態(tài)異常，空泡可能是自噬行為，可加大血清比例（不超過20%）或更換血清品牌改善細胞狀態(tài)。
4. 生長緩慢
在標準培養(yǎng)條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK-2的傳代周期約為3天。
當細胞生長緩慢，一周無法傳代時，需要考慮培養(yǎng)基特別是血清是否合適。選擇合適的培養(yǎng)基及血清，同時加大細胞接種密度可以改善。

培養(yǎng)基選擇：
HK-2最初建系使用無血清培養(yǎng)，眾多文獻以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下，HK-2也能良好生長。但胎牛血清的質量是關鍵，胎牛血清品質越高，HK-2狀態(tài)越好。若使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養(yǎng)瓶，以促使貼壁。