Cre模式小鼠助力Cre-loxP重組系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)時(shí)空特異性打靶

這其中少不了Cre鼠的助力

有小伙伴@沒有蛋糕和汽水這樣評(píng)價(jià)道：

“沒有Cre鼠，flox鼠敲得再完美也沒有意義。果然每一只flox鼠都在尋找它的Cre鼠。”

那么，屏幕前的你是否還缺一只合適好用的Cre鼠呢？

快來把flox鼠的這位好搭檔帶回家吧！

工具鼠模型推薦

Cre鼠常用于與flox鼠雜交進(jìn)行條件性基因敲除，也有研究將其用于切割位于報(bào)告基因前的終止序列，以達(dá)到熒光標(biāo)記特定細(xì)胞的目的。改造并優(yōu)化Cre，結(jié)合細(xì)胞/組織特異性的調(diào)控元件，可實(shí)現(xiàn)時(shí)空條件性靶基因敲除/表達(dá)。

賽業(yè)生物藥物篩選評(píng)價(jià)小鼠模型平臺(tái)可為研究人員提供Cre工具鼠、誘導(dǎo)型Cre工具鼠、熒光標(biāo)記模型等多類型工具鼠模型，助力新藥研發(fā)。

模型驗(yàn)證——以Cx3cr1-iCre小鼠為例

將Cx3cr1-iCre小鼠與Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，產(chǎn)生雙基因雜合子代小鼠，Cre酶介導(dǎo)的重組將導(dǎo)致tdTomato蛋白在子代Cre陽(yáng)性細(xì)胞中表達(dá)。分別采集7周齡子代小鼠的腦、皮膚、肝、腎、腸、脾和肺組織等組織，通過免疫熒光染色觀察Cre重組酶的表達(dá)情況。其基因型為——實(shí)驗(yàn)組（Cre+）：Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]；對(duì)照組（Cre-）：Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/CKI]。

1.Cre重組酶腦部的表達(dá)情況

腦部組織免疫熒光染色

Cre+（Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]）小鼠在腦部組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光，其表達(dá)與小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物IBA1的表達(dá)的存在共定位，表明在腦部小膠質(zhì)細(xì)胞中存在大量的Cre重組酶表達(dá)，而對(duì)照組（Cre-）小鼠中檢測(cè)不到tdTomato紅色熒光的表達(dá)，不存在Cre重組酶的表達(dá)。

2.Cre重組酶在皮膚組織中的表達(dá)情況

皮膚組織免疫熒光染色

Cre+（Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+]）小鼠在皮膚組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光，表明在該部位存在大量的Cre重組酶表達(dá)，表達(dá)的細(xì)胞可能是巨噬細(xì)胞。而對(duì)照組（Cre-）中的紅色熒光是由于Rosa26-LSL-tdTomato品系小鼠自身的泄漏造成的（內(nèi)部數(shù)據(jù)顯示Rosa26-LSL-tdTomato小鼠有幾率在皮膚出現(xiàn)輕微泄漏，但在其它部位并不存在泄漏）。

3.Cre重組酶在肺、腎、肝和腸道的表達(dá)情況

肺、腎、肝和腸道免疫熒光染色

Cre+小鼠在肺部、腎臟、肝臟和腸道的部分組織中存在tdTomato蛋白紅色熒光，表明在這些部位存在Cre重組酶表達(dá)，表達(dá)的細(xì)胞可能為巨噬細(xì)胞。而對(duì)照組（Cre-）小鼠中檢測(cè)不到tdTomato紅色熒光的表達(dá)，不存在Cre重組酶的表達(dá)。

4.Cre重組酶在脾臟的表達(dá)情況
 

脾臟免疫熒光染色

Cre+小鼠在脾臟中存在少量的tdTomato蛋白紅色熒光，表明在脾臟中Cre重組酶表達(dá)較低。而對(duì)照組（Cre-）小鼠中檢測(cè)不到tdTomato紅色熒光的表達(dá)，不存在Cre重組酶的表達(dá)。

總結(jié)
Cx3cr1-iCre小鼠模型中Cre重組酶的表達(dá)主要定位于腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞中，也可以在腸道、肺部、肝臟和皮膚的部分部位檢測(cè)到Cre重組酶介導(dǎo)的重組，這些發(fā)生重組的細(xì)胞可能是巨噬細(xì)胞，此外，在脾臟中也存在少量的重組信號(hào)。綜上所述，該模型可作為小膠質(zhì)細(xì)胞及其他組織巨噬細(xì)胞類型工具鼠使用。