Vari Fluor 680 SE染料

Vari Fluor 680 SE （VF 680 SE） 是 Vari Fluor SE 系列的標(biāo)記染料 （Ex/Em=680 nm/700 nm）。Vari Fluor SE 系列染料是一類含有 NHS 酯基的熒光染料，用于標(biāo)記抗體、蛋白質(zhì)、肽、胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離胺 （-NHX）。

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生物活性

Vari Fluor 680 SE體外研究

原液制備

1.蛋白準(zhǔn)備

為了獲得最佳標(biāo)記效果，請將蛋白 （抗體） 濃度配制為 2 mg/mL。

1） 蛋白溶液 pH 值應(yīng)為 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，則用 1 M 碳酸氫鈉進(jìn)行調(diào)整。

2） 若蛋白濃度低于 2 mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)大大降低，為了獲得最佳標(biāo)記效率，建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為 2-10 mg/mL。

3） 蛋白必須在不含伯胺 （如 Tris 或甘氨酸） 和銨離子的緩沖液中，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。

2.染料準(zhǔn)備

將無水 DMSO 稀釋 VF 染料，制成 10 mg/mL 儲(chǔ)備溶液。通過玻璃管或旋渦充分混合。

注：VF 儲(chǔ)存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。

3.染料工作液用量計(jì)算

標(biāo)記反應(yīng)所需的 VF 染料用量取決于要標(biāo)記蛋白的用量，VF 染料與蛋白的最佳摩爾比為 10 左右。

例：假如所需標(biāo)記蛋白為 500 μL 2 mg/mL 的 IgG （MW=150,000），用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg VF 染料，則所需 VF 體積為 3.95 μL，詳細(xì)計(jì)算流程如下（以 VF 488 為例）：

1） mmol （IgG） = mg/mL （IgG）×mL （IgG） / MW （IgG） =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol

2） mmol （VF 488） = mmol （IgG）×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol

3） μL （VF 488） = mmol （VF 488）×MW （VF 488） / mg/μL （VF 488） = 6.7×10-5 mmol× 834 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 5.6 μL （VF 488）

Vari Fluor 680 SE的使用方法

1.標(biāo)記反應(yīng)

1） 取算好體積的新鮮配制的 10 mg/mL VF 染料緩慢加入到 0.5 mL 蛋白樣品

溶液中，輕輕搖勻混合，然后短暫離心將樣品收集在反應(yīng)管底部。切忌劇烈混勻，防止蛋白樣品變性失活。 2） 將該反應(yīng)小管置于避光處，在室溫條件下輕輕搖晃孵育 60 分鐘，每隔 10-15 分鐘，將反應(yīng)小管輕輕顛倒幾次，以充分混合兩種反應(yīng)物，提高標(biāo)記效率。

2. 蛋白純化脫鹽

以下方案是使用 Sephadex G-25 柱純化染料蛋白偶聯(lián)物為例。

1）按照生產(chǎn)說明書制備 Sephadex G-25 柱。

2）將反應(yīng)混合物裝入 Sephadex G-25 色譜柱頂部。

3）當(dāng)樣品運(yùn)行到頂部樹脂表面下方時(shí)，立即加入 PBS （pH 7.2-7.4）。

4）向所需樣品中加入更多的 PBS （pH 7.2-7.4），完成柱純化。結(jié)合含有所需要的染料-蛋白質(zhì)綴合物的組分。

保存條件

-20℃ 避光保存

注意事項(xiàng)

1.VF 染料對(duì)光及濕度敏感。即用即配 VF 溶液并丟棄未使用的部分。

2.低濃度的疊氮化鈉 （≤3 mM 或 0.02％） 或硫柳汞 （≤0.02 mM 或 0.01％） 不會(huì)顯著干擾蛋白標(biāo)記；但是 20-50％ 的甘油會(huì)降低標(biāo)記效率。

3.避免使用含伯胺 （例如 Tris，甘氨酸） 或銨離子的緩沖液，它們與待標(biāo)記蛋白會(huì)發(fā)生競爭反應(yīng)降低標(biāo)記效率。

4.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

5.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考